中华人民共和国国家标准
GB/T 36832-2018
黑高梁检疫鉴定方法
Detection and identification of SorghumalmumParodi.
中国国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口疫局. 本标准负责起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国浙江出人境检验检本标准主要起草人：印丽萍、薛华杰、吴志毅、傅怡宁、张宁.
黑高梁检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了黑高梁检疫鉴定的形态学方法和分子筛查方法.本标准适用于黑高梁的检疫鉴定.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
2.1 小穗spikelet
2.2小花floret由禾本科的花同包被其外的内外科组成的结构.
2.3小德轴rachilla每个小穗有一短轴，其上着生1朵至多朵小花.
2.4 科片squama禾本科小穗上的小花外面的两片苞片.注：在外一片为外称（lemma、包着的内部一片为内科（palea）.
2.5
禾本科植物基部的苞片.
注：基部常有一对生下面或外面的-片称第-颖（first glume)，生上方或里面的-片称第二颖（second glume).
3基本偿息
学名：Sorghum ala Parodi.英文名 :Columbus grassalmum grassalmum sorghum中文名：黑高梁、杂高梁Poales 禾本科 Poaceae，高梁族Andropogoneae，高梁属 Sorghaum Moench. 分类地位（恩格勒系统）：被子植物门Angiospermae，单子叶植物纲Monocotyledoneae，禾本目分布：阿根廷、美国、智利、新西兰、澳大利亚、南非、加拿大、俄罗斯.传播途径：黑高梁常以种子（小穗）形式混人粮谷物、羊毛等植物产品中随货物调运进行传播.其他信息：高梁属形态学等信息描述参见附录A.黑高梁是多年生植物.为假高梁与苏丹草[S.sudanense（Piper）Stapf或与野（喀麦隆）高粱[S.arundinaceam（Desv.）Stapf]的杂交种.黑高梁与同属的假高梁、苏丹草、光高梁、拟高粱等近似
种难以区别：其小穗（小花、颖果）形态区别见附录B
4位器和用具
4.1仪器设备
体视显微镜（10×~40×）、放大镜、孔筛（孔径5.0m、3.5mm、2.5mm、1.5mm、1.0mm）、PCR仪、电子天平（1/10000g）、pH计、冷冻混合研磨仪、电泳仪、凝胶成像系统、高速冷冻离心机、解剖 镜、涡旋振荡器、冰箱、微波炉.
4.2用具
微量移液器（2μL、10μL、20pL、100L、200μL 1000μL）及相应的吸头、微型离心管、PCR管、直径 白瓷盘、载玻片、解剖刀、解剖针、镊子、培养Ⅲ、指形管、标本盒、标本瓶、标签、樟脑、干燥剂、可调式3.0mm的灭菌钢珠等.
4.3主要试剂
氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）、Taq聚合酶、10XPCR缓冲液.CTAB法提取试剂，见附录C中C.1. 植物基因组提取试剂盒、DNA纯化试剂盒、超纯水，DNAMarker、琼脂糖、核酸凝胶染料、液氮、脱
5实验室检测和鉴定
5.1样品检测
5.1.1粮谷类、油籽类
圆孔筛，双层筛样：直径在2.5mm~5.0mm的样品，如大麦、小麦、亚麻籽、高梁等，可采用3.5mm和 直径大于或等于5.0mm的样品，如大豆、玉米、菜豆等，建议选取孔径为的5.0mm和1.5mm的2.5mm网孔筛，双层筛样：如直径小于或等于2.5mm的样品，如芝麻，油菜籽等，可采用2.5mm和1.0 mm圆孔筛，双层筛样.
分次将样品倒入上层筛中，每次样品量不超过上层筛内高度的1/2.每次筛样，同一方向近同一平面旋动10次～20次.筛样完毕后，将每层筛上物和筛下物分别倒人白瓷盘中.
用载玻片仔细拨动上层筛的筛上物，并用镊子将疑似黑高梁的种子（小穗）放人培养Ⅲ中，待镜检.
在样品倒人白瓷盘、筛样等过程中，发现的疑似黑高梁的植株应挑出，放人白瓷盘中，待镜检.
5.1.2原羊毛、落毛
将原羊毛、落毛在白磁盘中展开，仔细检查混人的杂草. 将疑似黑高梁的植株挑出，放人白瓷盘中，待镜检.用镊子将疑似黑高梁的种子挑出，放人培养血中，待镜检.
5.1.3集装箱残留物
将集装箱残留物倒入白瓷盘中，摊平，仔细检查. 将疑似黑高梁的植株挑出，放人白瓷盘中，待镜检.用载玻片仔细拨动，并用镀子将疑似黑高粱的种子（小穗）挑出，放入培养Ⅲ中，待镜检.
5.2镜检
在解剖镜或放大镜下镜检.进行植株花部特征和小穗内部特征观察时，辅以解剖刀、解副针等工具.
5.3鉴定方法
5.3.1形态学整定
5.3.1.1茎
根状茎，短面弯曲.
秆，直立，不分枝或有时自下部节上分枝：高1.8m~2.8m.有时可达4 5m，直径6mm~110mm；8节~10节：秆节间，实心长7cm~40cm，光滑，上部无毛；秆节被短柔毛，黑高梁的根状茎形态参见附录D 中图D. 1
5.3.1.2叶
叶鞘无毛或基部有柔毛：叶舌，长2.5mm~3.5mm.硬膜质，顶端近平截，无毛；叶片表面光滑，无毛，线形至线状披针形，长25cm~50cm，宽2cm~5cm，中部最宽，向两端渐狭窄，中脉白色，边缘软骨质，具微细的小锯齿.黑高梁的叶形态参见图D.1.
5.3.1.3花序
圆锥花序长约40cm，分枝较细而斜升，单生或数枚在主轴上轮生或近一侧着生，基部腋间具灰白色柔毛；每一总状花序具2节~5节，下部裸露部分长1.5cm~4.0cm：总状花序轴与小穗柄不易折断.黑高梁的花序形态参见图D.1.
5.3.1.4小穗
无柄小穗圆形或长椭圆形，长5.5mm~6.5mm，上端具柔毛或近于无毛，宽1.5mm~2.0mm，成熟后黑色或黄绿色，不脱落或迟缓脱落，基盘钝，具短柔毛：额坚纸质或薄革质，第一颖具5脉~7脉，上部明显，除背部的毛较疏或无毛外，其余部分的毛较多，第二颖上部具脊.无柄小穗内含2小花，第一小花不育，第一外科椭圆形，膜质透明，边缘具纤毛，2脉；无明显内科.第二外科披针形，顶端钝或微宽倒卵形，顶端微凹，无毛：雄蕊3枚；子房椭圆形.有柄小穗雄性，较无柄小穗狭窄，额的质地较薄.黑高梁的小穗形态参见图D.2.
5.3.1.5颖果
高梁的颖果形态参见图D.3. 颖果卵形或椭圆形，栗色至淡黄色.长3.0mm~3.8mm.宽1.8mm~2.0mm，厚约1.1mm.黑
5.3.2DNA条形码筛查鉴定方法
5.3.2.1样品的处理
将需要提取DNA的植物材料（种子为2粒~3粒，硅胶干燥的叶片为10mg），放人2mL的微型离（30次/8）. 心管中，每个管内加2粒～3粒直径3.0mm灭菌钢珠，加液氮后使用冷冻混合研磨仪研磨1min
