GH
中华人民共和国供销合作行业标准
GH/T 1493-2025
蜂王浆中糠氨酸的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination of furosine in royal jelly-liquid chromatography-tandem mass spectrometry method
中华全国供销合作总社 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由中华全国供销合作总社提出.
本文件由全国蜂产品标准化技术委员会（SAC/TC601）归口.
中心、陕西国蜂大健康产业有限公司、瑞之恩生物科技（河南）有限公司. 本文件起草单位：中国质量检验检测科学研究院、安徽泓顺源生物科技有限公司、泰皇岛海关技术
本文件主要起草人：陈辉、谢瑜杰、史孟杰、崔宗岩、常巧英、黄学者、汪昌宏、陈云、朱新科.
蜂王浆中糠氨酸的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本文件规定了蜂王浆中糖氨酸测定的液相色谱-申联质谱法.本文件适用于蜂王浆中糖氨酸的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
试样用盐酸溶液高温水解后，经Cs固相萃取柱净化，液相色谱-申联质谱仪测定，外标法定量.
5试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1甲酸（CHO）：色谱纯.5.1.2甲醇（CHsOH）：色谱纯.5.1.3浓盐酸（HC1）.5.1.4甲酸铵（COOHNH4）：色谱纯.
5.2溶液配制
5.2.110.6mol/L盐酸溶液：在12mL水中加入88mL浓盐酸（5.1.3），混匀.5.2.23mol/L盐酸溶液：在75mL水中加入25mL浓盐酸（5.1.3），混匀.5.2.31.5mol/L盐酸溶液：在87.5mL水中加入12.5mL浓盐酸（5.1.3），混匀. 5.2.40.01%甲酸水溶液：取0.1mL甲酸（5.1.1）于1000mL容量瓶中，用水稀释至1L，混匀.5.2.50.01%甲酸甲醇溶液：取0.1mL甲酸（5.1.1）于1000mL容量瓶中，用甲醇稀释至1L，混匀.5.2.62mmol/L甲酸铵-0.01%甲酸水溶液：称取0.126g甲酸铵，用0.01%甲酸水溶液（5.2.4）溶解并稀释至1000mL，摇匀.5.2.72mmol/L甲酸铵-0.01%甲酸甲醇溶液：称取0.126g甲酸铵，用0.01%甲酸甲醇溶液（5.2.5）溶解 并稀释至1000mL，摇匀.
5.3标准品
5.3.1糖氨酸（Furosine，CizHisNzO4，CAS号：19746-33-9，纯度≥99%）.
5.4标准溶液配制
5.4.1糖氨酸标准储备液（1000mg/L）：准确称取糠氨酸（5.3.1）标准品10mg（精确至0.01mg），
置于10mL容量瓶中，加入3mol/L盐酸溶液（5.2.2）溶解，稀释并定容，混匀，配置成浓度为1000mg/L的糖氨酸标准储备液，2~8℃条件下保存，有效期6个月，5.4.2糖氨酸标准中间溶液（10mg/L）：准确移取嫌氨酸标准储备液（5.4.1）100gL，于10mL容量瓶中，用3mol/L盐酸溶液（5.2.2）稀释并定容，混匀后配置成浓度为10mg/L的糖氨酸标准中间溶液，5.4.3糖氨酸标准中间溶液（1mg/L）：准确移取糖氨酸标准储备液（5.4.2）100uL，于10mL容量瓶 2~8℃条件下保存，有效期3个月，中，用3mol/L盐酸溶液（5.2.2）稀释并定容，混匀后配置成浓度为1mg/L的糖氨酸标准中间溶液，
2~8℃条件下保存，有效期3个月.
5.5材料
5.5.1Cix固相萃取柱：500mg/3mL，或相当者.5.5.2微孔滤膜：0.22μm.5.5.3密封耐热防爆试管：20mL.
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源.6.2分析天平：感量0.01g和0.00001g.6.3涡旋混合器. 6.4烘箱：110±2°℃.6.5固相萃取装置.
7试样制备与保存
7.1试样的制备
室温解冻至融化，搅拌均匀，将样品装入洁净容器内，密封，并做上标记.
试样于一18°℃下保存.
8测定步骤
8.1提取
盐酸溶液（5.2.1），涡旋混匀.混匀后于110°C烘箱中加热水解24h（加热约1h后，轻轻摇动试管）. 准确称取0.5g（精确至0.01g）蜂王浆样品至20mL密封耐热防爆试管中，加入6mL10.6mol/L水解后，将密封耐热试管从烘箱中取出，冷却至室温后用滤纸过滤，待净化.
8.2净化
柱，弃去滤液，5mL3mol/L盐酸溶液（5.2.2）洗脱，收集洗脱液，移取适量洗脱液，用等体积超纯水 Cs固相萃取柱（5.5.1）用5mL甲醇（5.1.2）和10mL水依次活化.取3mL滤液于Cg固相萃取稀释，过0.22um滤膜（5.5.2），液相色谱-申联质谱仪测定.
8.3测定
GH/T 1493-2025
8.3.1液相色谱参考条件
a)色诺柱：C18柱(2.1mmx100mm，1.7μm），或相当者：b)流动相：A：2mmol/L甲酸铵-0.01%甲酸水：B：2mmol/L甲酸铵-0.01%甲酸甲醇（梯度洗脱，见表1）； c)流速：0.2mL/min：d)柱温：30°℃：e)进样量：2L.
表1梯度洗脱条件
时间（min) 流速（mL/min） A(%) B(%)0.0 0.2 66 10.2 0.2 66 11.0 0.2 0 1003.0 2.0 0.2 0.2 66 0 100 16.0 0.2 66
8.3.2质谱参考条件
a)离子源：电喷雾离子源（ESI）：b)扫描方式：正离子扫描：e)检测方式：多反应监测（MRM），糠氨酸MRM参数见表2：d)离子源温度：150°℃：e)脱溶剂温度：550°℃； f)脱溶剂气体流速：800L/h：g）毛细管电压：1kV.
表2糠氨酸多反应监测（MRM）参数
化合物名称 定性离子对 （m/2) 定量离子对 (m/z) 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (eV)糠氨酸 255.1/84.4 28255.1/130.0 255.1/130.0 30 18
8.4基质匹配标准工作曲线
选择相对新鲜的蜂王浆为空白样品，按照8.1~8.2部分进行前处理，得到空白基质溶液.移取一定体积的糖氨酸标准中间溶液（5.4.3），用空白基质溶液稀释成浓度为0.00125mg/L、0.0025mg/L、0.005mg/L、0.0125mg/L、0.025mg/L、0.05mg/L、0.075mg/L的氨酸基质匹配标准工作溶液.
8.5液相色谱-串联质谱测定
8.5.1定性确证
被测化合物选择1个母离子，2个子离子，在相同实验条件下，试样溶液中糠氨酸的保留时间与标准溶液中相应组分的保留时间一致，相对偏差在±2.5%之内，离子对都出现，且相对离子丰度与浓度相当的标准溶液相对离子丰度一致，其允许偏差应符合表3的要求.
