中华人民共和国国家标准
GB/T 37280-2019
荧光增白剂产品中微生物的测定
Determination of microorganisms in fluorescent brighteners product
中国国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由中国石油和化学工业联合会提出.
本标准由全国染料标准化技术委员会（SAC/TC134）妇口.
本标准起草单位：浙江传化华洋化工有限公司、佛山市顺德区德美瓦克有机硅有限公司、中国化工经济技术发展中心、沈阳化工研究院有限公司、国家染料质量监督检验中心.
本标准主要起草人：王勇、马艳围、何智勇、薛岩、姬兰琴、杨振梅、蔡定汉、尤建鹏、肖成贵.
荧光增白剂产品中微生物的测定
1范围
本标准规定了荧光增白剂产品中菌落总数和霉菌的测定方法.本标准适用于荧光增白剂产品中菌落总数和霉菌的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法（1SO3696：1987，MOD)GB/T8170-2008数值修约规则与极限数值的表示和判定
3实验室基本要求
3.1环境
3.1.1实验室环境不应影响检验结果的准确性.3.1.2实验室的工作区域应与办公室区域明显分开.3.1.3实验室工作面积和总体布局应能满足从事检验工作的需要，实验室布局应采用单方向工作流 程，霉菌和一般细菌的培养场所应分开，避免交叉污染.3.1.4实验室内环境的温度、湿度、照度、噪声和洁净度等应符合工作要求.3.1.5一般样品检验应在洁净区域（包括超净工作台或洁净实验室）进行，洁净区域应有明显的标示.3.1.6病原微生物分离鉴定工作应在二级生物安全实验室进行.
3.2人员
3.2.1检验人员应具有相应的教育、微生物专业培训经历，具备相应的资质，能够理解并正确实施检验.3.2.3检验人员应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为污染样品.3.2.4检验人员应在检验过程中遵守相关预防措施的规定保证自身安全.3.2.5有颜色视觉障碍的人员不能执行涉及辨色的实验.
4仪器和设备
4.1分析天平，感量0.001g.4.2无菌锥形瓶. 4.3无菌平Ⅲ：直径9cm.
GB/T 37280-2019
4.4无菌刻度吸管：10mL、2mL.1ml.4.5无菌试管.4.6无菌量筒.4.7pH计或精密pH试纸.4.8高压灭菌锅.4.9均质器. 4.10恒温培养箱.4.11放大镜或显微镜.
5培养基和试剂
5.1实验室用水
实验室用水应符合GB/T6682一2008中二级水的要求.
5.2菌落总数测定用培养基
5.2.1成分
胰蛋白陈大豆琼脂培养基（TSA）.咸分为：胰蛋白陈 15 g植物蛋白陈 5g氯化钠 5g琼脂 水 12 g1 000 mL
5.2.2制法
将上述成分加于水中，煮沸溶解，调节pH=7.3士0.2.分装于试管或锥形瓶，121℃C高压灭菌15 min.
5.3霉菌总数测定用培养基
5.3.1成分
马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）.成分为：马铃薯浸出粉 10 g葡萄糖 20 g琼脂 13 g氯霉素 0.1 g水 1 000 mL
5.3.2制法
称取各组分溶于1000mL水中，煮沸至溶解，分装后经121C高压灭菌15min备用.
5.4无菌生理盐水
5.4.1成分
氯化钠 8 5 g水 1 000 mL
5.4.2制法
称取8.5g氯化钠溶于1000mL水中，121C高压灭菌15min.
6操作步骤
6.1样品匀液制备
6.1.1固体和半固体样品
称取25g样品置于盛有225mL生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10 000r/min均质1min~2min，制成1：10的样品匀液.
6.1.2液体样品
以无菌吸管吸取25mL样品置于盛有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液.
6.210倍稀释液制备
管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），报摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀， 用1mL无菌吸管吸取1：10样品匀液（6.1)1mL，沿管壁缓慢注于盛有9ml生理盐水的无菌试制成1：100的样品匀液.
继续上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液.每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或
吸头.
6.3培养
根据对样品污染状况的估计，选择2个或3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），用无液加入两个无菌平Ⅲ内作空白对照.
根据测定要求，及时将15mL~20mL冷却至46℃C的菌落总数测定用培养基（5.2）或霉菌总数测定用培养基（5.2）（可放置于46C土1C恒温水浴箱中保温）倾注于各平Ⅲ，并转动平Ⅲ使其混合均匀.1C培养120h±2 h 待琼脂凝固后，将平板翻转，测定菌落总数需要在37℃±1C培养48h±2h，测定霉菌需要在28C士
6.4菌落计数
6.4.1可用肉眼观察，必要时用放大镜或显微镜观察，记录稀释倍数和相应的菌落数量.菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示.6.4.2如果空白平板有菌落生长，则此次检测结果无效，应重新进行检测.
