中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 2701-2025代替SN/T2701-2010
动物炭疽检疫技术规范
Quarantinetechnicalspecificationforanimalanthrax
中华人民共和国海关总署发布
前言
本文件按GB/T1.1一2020（标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
编辑性改动外，主要技术变化如下：
更改了生物安全要求（见第5章，2010年版的第5章）；
一增加了多重实时荧光PCR检测法（见第10章）
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口.
本文件起草单位：中华人民共和国呼和浩特海关、海关总署国际检验检疫标准与技术法规研究中心、中华人民共和国太原海关、中华人民共和国重庆海关、内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业技术推广中心.
本文件主要起草人：王海艳、赵治国、陈林军、季新成、崔强、延涵、巩红霞、刘丹、聂福平、史梅梅、王瑞、石新华、张娜.
本文件于2010年首次发布，本次为第一次修订.
动物炭疽检疫技术规范
1范围
本文件描述了动物炭疽临床诊断、病原分离鉴定、Ascoli反应、多重实时荧光PCR等方法.本文件适用于动物炭疽临床诊断、流行病学监测及动物产品和环境样品检测.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于 本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088出人境动物检疫采样SN/T2984检验检疫动物病原微生物实验活动生物安全要求细则 GB19489实验室生物安全通用要求
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
下列缩略语适用于本文件.CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammonium bromide） DNA：脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid)EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid)PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）Tris：三羟甲基氨基甲烷（trihydroxymethyl aminomethane)TE：三羟甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸（Tris-EDTA）
5生物安全要求
应符合GB19489和SN/T2984等的相关规定.
5.1炭疽为人畜共患病，试验环境、防护要求、样品采集、实验室检测、样品包装和运输以及废弃物处理
5.2对疑似患病动物户体，严禁进行开放式解剖检查，应在保证生物安全的条件下进行样品采集.
6临床诊断
动物炭疽流行病学特征、临床症状和病理变化见附录A，依据本病流行病学特征、临床症状和病理
SN/T 2701-2025
7样本采集
7.1新鲜疑似炭疽动物病料采集
7.1.1活体疑似炭痘病例样品采集
抗凝采血管中密封待检，或用灭菌拭子雁取病变部位水肿液、渗出液以及天然孔流出的血性物质放置于载玻片盒中待检， 无菌采样管中密封待检.同时，取少许血液或组织液直接涂于载玻片上，自然干燥后火焰固定，放置于
7.1.2疑似炭痘死亡病例样品采集
管中密封待检.对于已经错剖的疑似炭疽动物户体，应立即停止解剖活动，可抽取1mL～3mL血液或管中密封待检.同时，用载玻片做血液涂片或组织触片，自然干燥后火焰固定，放置于载玻片盒中待检. 血性物质于无菌EDTA抗凝采血管中密封待检，或者用灭菌拭子取组织切面渗出液故置于无菌采样
7.2陈旧、腐败脏器或户体样品采集
陈旧、腐败脏器或户体等病料每种样品采集约50g（或50mL）.
7.3动物产品样品采集
按照GB/T18088规定要求进行采样.
7.4环境样品采集
7.4.1土壤样品采集
怀疑受炭疽芽孢杆菌污染的区域（疑似炭疽疫点等），分散采集半径50m以内表层土壤样品（深度10 cm 以内）5 份，每份 50 g~100 g.
7.4.2水体样品采集
怀疑受炭疽芽孢杆菌污染的水源，如牲畜饮水槽、蓄水池、池塘和河流等，分散采集水样5份，每份500mL.蓄水池和池塘等，自怀疑泄污口处半径100m范围内分散采样：河流自怀疑泄污口处下游100m~1000m范围内分散采样.水深不足1m时，在1/2水深处采样：水深超过1m时，在水面下 0.5m处采样.
7.5样品的保存与运输
或容器内：若需长期保存，应置于一70C以下冰箱或容器内.
7.5.2样品的运输包装材料应符合传染性生物因子包装材料的要求，包装容器应严格密封，消毒处理.
8病原分离鉴定
8.1仪器和设备
8.1.1生物安全柜.8.1.2恒温培养箱：37℃.8.1.3二氧化碳培养箱：37℃，二氧化碳浓度（体积分数）20%. 8.1.4恒温水浴箱或恒温金属浴：37C，62.5C士0.5℃.8.1.5冰箱：2C~5C、-20℃、-70C.8.1.6生物显微镜：100×、400×、1000×.8.1.7高压蒸汽灭菌器.8.1.8高速冷冻离心机：最大离心速度在12000r/min以上8.1.9普通PCR仪. 8.1.10水平凝胶电泳槽.8.1.11电泳仪，8.1.12凝胶成像系统.8.1.13激涡混匀仪，~1喜8
8.2培养基和试剂
8.2.1含0.7%碳酸氢钠的营养琼脂平板：按附录B中B.1.8.2.2多黏菌素血琼脂平板：按B.2.8.2.3普通营养肉汤：按B.3.8.2.4溶菌酶多黏菌素琼脂平板（PLET）：按B.4. 8.2.5革兰氏染色液：按B.58.2.6碱性美蓝染色液：按B.6.8.2.7无菌脱纤马血或羊血.8.2.8电泳级琼脂糖粉.8.2.9Taq DNA聚合酶：5 U/pl. 8.2.10DNA Marker（脱氧核糖核酸分子质量标准）.8.2.1110×Tag DNA聚合酶缓冲液（10×Taq Buffer).8.2.12dNTP混合物：脱氧腺苷三磷酸（dATP）、脱氧胸苷三磷酸（dTTP）、脱氧鸟苷三磷酸（dGTP）、脱氧胞苷三磷酸（dCTP）各2.5mmol/L.8.2.1350×TAE电泳缓冲液：按B.7.8.2.146×加样缓冲液：按B.8. 8.2.15溴化乙锭溶液：按B.9.8.2.16PBS缓冲液（pH7.2~7.4)：按B.10.8.2.17洗样液：按B.11.8.2.18实验室用水：应符合GB/T6682中二级水的要求.8.2.19阳性对照：含有目标基因片段的质粒， 8.2.20阴性对照：非致病性枯草芽孢杆菌或其他非目标菌.
