SN
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T1198-2003
Protocol of the polymerase chain reaction for detecting genetically modified ponents in potatoes
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局
前言
本标准由国家认至认可监督管理委员会费出并日口， 本标准的附录A为资科性附录本标雅起草单位：中华人民共和国山东出人院检验检疫局， 本标准主要起手人，高宏停、梁成球、作艺兵、权油题，本标准系首次发布的检验检疫行业标准.
马铃薯中转基因威分定性PCR检测方法
1范
本标准规定了马特薯中的转基因成分的定性PCR检测方涨，
本标准适用于转基国马铃暮品种 （NEW LEAF) POTATO LINES BT-06 ATBT 04-06 ATBT 04-31. ATBT 04-36 AND SP8T C2-05; (NEW LEAF* PLUS) POTATO LINES PBMT 21-129 PBMT 31-350 AND PBMT 22-82 (NEW 1 EAF® Y)POTATO LINES RBMT 15-101 SEMT15-02ANDSE3T15-15等品种的转基器马特暑块蒸.植标、生暑条，生著片、淀粉的检测.
2览性到用文神
下列文件中的条款通过本标难的引用百或为本标难的条款.凡是注日期的引用文件.其随后的修我单（不包括助误的内容）或修订断均不造用于本标座，然真，致助根器本标理达成协以时各方研究 是否可使用这些文件的最新版本，凡是不往日期的引用文件，其最新本适用于本都准.
GB/T6682分折实验室用水规特和实验方然 SN/T1193基器检验实验室技术要求SN/T1194物及其产品转基因成分检测抽样和制样方实 SN/T1294桂物及其加工产品转基因式分实时费光PCR定性检验方法
3水谱、飞文和地降通
下列水选福定文（理略香）造用于平标雀.
3 1
特基因transgre
行表适以使或物种在得联的品护特证.
聚合路式反应pelymrs chala reactn.PCR
计的丙条引物分别与镇板DNA商条装上相店的一政互补序孔发生道火面相互地合，楼靠在DNA聚合 板基因序列先经高盈变性成为单链，在DNA家合期作用和适宜的反应条件下，根强模版序列论腾的作用下以固种脱氧模糖额载（dNTP）为底物，使引物得以冠带-然应不断重复交性，退火和运师达 一提坏，使款扩增的基器片题以几付倍数扩增.
3.3财增
3.3.1Pau马铃薯种属特需始DNA引物，扩增的片级为马价著决蒸C藏蛋白Patatin高因片我.
3.3.4NOS nopaline synthese terminator.别脂碱合成骗3*特录婷止于.
3. 3.5PVYep:potato Y vires coat protein.马神著 Y 病毒外克蛋白.
3. 3.6 cry 3A -个曲 B rharingiresis subep.Tenrbriamis (B. L 1 ) strain BI 256-B2 的董白 这个面 白具有抗虫措位，尤其是可以选择性的染死料罗控多马件署甲业（Coloadopoutobeetie larvet）.
3. 3. 7 CP4 EPSPS S-enolpyrulshlimate-3-ghosphete synthase 5-enolpyrul shikimete-3-phosphatesytae，来露于农杆离Agrecterimsp.SunCP4的5-弄章酸-3-确狼合成.
3.3.8PLRVreppottoleafrollvirus.马要@叶病毒重复序所，
3. 3.9 E93°:the 3′ non-translated region of the pea ribulose-1 5-bisphosphate cerbexylase small
3. 3. 10 ArsbSSU1A;arabidopsis thaliasa ribuloae-1 ′ 5-biapboaphate carboxylase (Rubisco) amall sobunit ats 1A prometer srsifopsis thaiana 的核附增-1，5-二确股般化册小亚著 1A的脂动于.
著器. 3.3.11aads（resides outsideT-DNA)在转座自大斯杆澳T=7中编码链每素服背斯（著）转琴腾的
3.3. 12oriV （residrs outside T-DNA)个医自农杆图Agrobacterium时 RK2 黑粒的1.3 kb 的复制 区城.
3.3.13ori 322，（residesoutside T-DNA）一个提自pBR322股松的 1.8kb的片级，其中包含复制区域和转够继合位点bom.
3.3. 14FMV 35S* promotor derived from Fgwort momait viru (FMV) 鲁E时病毒 35S 启子
4污染指
检图过程中防止变又污象的指连烈SN/T1193中的规定执行.
5的杆与制称
对于转基因样品通用的推排方法-教预5N/T1194的规定类行.
5.1马转著产品抽精量
5.1.1马餐薯块蒸、生薯条、生薯片、株抽呼量.
按期表1中比例的种，其中每包取样数的单位对于换基，生著条，生等片为个，对于植核为株.
表1马价著块案、植殊、生膏杂的抽祥量
量/包 2 251506 3 3501~35 000 ≥15 t01 5 5 6
5.1.2马价著院粉排样量.
按表2中出例抽样.
表2马转要淀验的抽特量
开包教H 邮包取样数目/051~15 1460 ≤15 2 3 5 120 120 120501~3 200 1$1-500 13 120 12035 001 ~560 000 3 201~35 000 20 12 120 100≥500 001 50 120
5.2马付要试样制备
5.2.1马转塞块茎、生著条、生著片、植的试标制备
对于间一截次的马价薯换多、生要条、生要片，把每个样品院干净，在任意都位用小刀付下约1cm的样品作为试磷用于提取DNA.
对于属一独次的马待幕植费，章每个样品的一片时斤洗干净，用小刀帽下2co的叶元作为试祥用于提取DNA
5.2.2马铃要定粉试祥的制备
把每包祥的120g院粉充分现合.从每个120g中取100mg作为试样，
6润定方法
6.1照理
特异性扩增外基因的DNA开新，服据PCR扩增结果.列新饮所品中是否先有然固成分 品经过员案DNA后，针对特基因植物所雅人的外罪基四的基因序列设计引物，通过PCR技术，
6.2试别和树料
6.2.1引物：拨预表3中换供的引物序判合成引物，加人无离子水配成100pmol/p1.把存，配成直续用于PCR反应的20mol/L的工作流，见属录A.
除另有规定外，其继试剂为分析此减生化试到，水为族用GB/T6682规定的一级水，
表3转基因马特著PCR检测用的型物序列及PCR产物的大小
91 PATA XN AK (m 1 r 180 s8 co sh 5.4 R.5°gg pnt tc agg egt oct tg3 115 bo 内对理 备性CaMV 1S F 5'-get et et eet grt ete e-]° 8 igat eg g8g sm gg rg r3' 135 bp NEW LEAPe 静选，董定检岗FMV $S F 5'-agt r ang et cs c g e1' 3t1 ho 票选，签定检测 NEW LEAP* PLUS8 5'-cst lng rgs gu ser igr oag e-3' NEW LEAF* Y 选检制N0S F 5′-gas ir igt gr ogg lci tl* R.5'-ta lor tag mn eg ege t3* 110 bp NEW LLAP* PLUS NEW LEAP Y除选检列 NEW LEAYNPTII F 5°ep tt eet gtr e -} R. 5'-get ot crt grt oga e-3" 173 NEW LKAP* PLUS NEW LEAF YNEW LEaF#FLRVrep 外源 F 5′-cg toa ia ac ng scg ao-} R.5'-t cm ms cm ng 1o sg3′ 172 bp NEW LEAY rLUS 定检FVT) F 5'-gas tus sgg cts tsa cgt ce3 R.5'-qat cg ome lgr te sms ?° 1 NEW LEAPY5'npr pr gre get et e t - 签定检测CryIA 1'-et ees er e ot ct g7 112 bp NEW LEAP NEW LEAF PLUS NEW LEAF* Y
