中华人民共和国国家标准
GB 31614.2-2026
食品安全国家标准
食品中Y-氨基丁酸的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
食品安全国家标准
食品中-氨基丁酸的测定
1范围
本标准规定了食品中Y-氨基丁酸含量的液相色谱测定方法.本标准第一篇适用于食品中Y氨基丁酸含量的测定.本标准第二篇适用于y-氨基丁酸原料中y-氨基丁酸含量的测定.
第一篇食品中Y氨基丁酸的测定液相色谱法
2原理
试样经乙醇溶液提取，上清液用丹磺酰氯在碱性环境下衍生，衍生物经反相C：色谱柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，外标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1无水乙醇（CHCHOH），3.1.2乙晴（CHCN）：色谱纯. 3.1.3盐酸甲胺（CHNHHCI).3.1.4盐酸（HC1)：36%~38%.3.1.5无水碳酸钠（NaCO）.3.1.6无水乙酸钠（CHCOONa）.3.1.7乙酸（CHCOOH). 3.1.8丹磺酰氯（5-二甲氨基萘-1-磺酰氯）（CHCINOS）：色谱纯.3.1.9甲醇（CHOH）：色谱纯.
3.2试剂配制
3.2.1盐酸溶液（1mol/L），吸取9ml盐酸，加水至100mL，混匀.盐酸溶液调pH至9.5，加水定容至50mL，混匀.该溶液在室温下3个月内稳定.3.2.3丹磺酰氯乙腾溶液（1.5g/L）：称取0.15g丹磺酰氯，用乙晴溶解并定容至100mL，混匀.临用现配.3.2.4丹磺酰氯乙晴溶液（4.5g/L）：称取0.45g丹磺酰氯，用乙晴溶解并定容至100mL，混匀.临用
现配.3.2.5盐酸甲胺溶液（20g/L)：称取2.0g盐酸甲胺，用水溶解并定容至100mL，混匀.该溶液保存在0℃~4℃下3个月内稳定.3.2.6乙酸钠缓冲溶液（10mmol/L pH4.2）：称取0.820g无水乙酸钠，加800mL水溶解，用乙酸调节pH至4.2.加水稀释至1000mL，混匀.
3.2.7提取溶液（82）：将无水乙醇、水按8：2的体积比混合均匀.
3.3标准品
Y-氨基丁酸（C，H，NO，CAS号：56-12-2）：纯度≥99%的标准品或其溶液.
3.4标准溶液配制
3.4.1Y-氨基丁酸标准储备液（1000mg/L)：准确称取Y氨基丁酸标准品50mg（精确至0.1mg）于小烧杯中，用水溶解并转移至50mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，配制得质量浓度1000mg/L的标准储3.4.2y-氨基丁酸标准中间液（100mg/L）：准确吸取2.50mLy-氨基丁酸标准储备液于25mL容量瓶 备溶液.置于0℃～4℃下棕色玻璃瓶中密封保存，有效期3个月.中，用水定容至刻度，混匀，配制得质量浓度100mg/L标准中间液.临用现配.3.4.3Y-氨基丁酸标准系列工作液：分别准确吸取0.10mL.0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL标准中间液于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，得到质量浓度分别为1.00mg/L、5.00 mg/L、10.0mg/L 20.0mg/L、50.0 mg/L、100mg/L系列标准工作液.临用现配.
牌9'
3.5.1微孔滤膜：聚四氟乙烯（PTFE)，0.45μm，3.5.2快速定量滤纸.
4仪器和设备
4.1液相色诺仪：配紫外检测器.4.2天平：感量为0.1 mg和0.001g.4.4pH计：精度0.01. 4.3超声波振荡仅.4.5涡旋混合器.4.6离心机：转速≥5000r/min4.7高速粉碎机. 4.8匀浆机.
5分析步骤
5.1试样制备
碎机充分粉碎并搅拌均匀：糖果、巧克力及其制品等黏性较大的样品先一18C冷冻后经高速粉碎机粉 液态样品混匀，含气样品使用前超声除气：半固态样品用组织匀浆机匀浆均匀：固体样品用高速粉碎均匀，胶基糖果用剪刀剪碎.制备好的试样密封、避光于0℃～4C冷藏保存.
5.2试样提取
称取试样1g（精确至0.001g）于50mL离心管中，加人40℃左右的温水10mL（糖果、巧克力等样品加60C左右的温水10mL），超声使试样分散溶解.冷却至室温，加20mL提取溶液，涡旋混匀，超声提取10min，于5000r/min离心5min-将上清液（必要时可用快速定量滤纸过滤）转人50mL容量 瓶中，试样残渣再用10mL提取溶液提取一次，合并2次提取液，用提取溶液定容至50mL，混匀，离心得到待衍生试样溶液.
5.3衍生反应
1.5g/L丹磺酰氯溶液，充分混合，室温避光衍生反应2h（衍生开始1h后，需涡旋5s），加人0.1mL盐 准确吸取1.00mL待衍生试样溶液到10mL的离心管中，加人1.00mL碳酸钠缓冲溶液，1.00mL酸甲胺溶液，涡旋混合以终止反应于5000r/min离心5min.取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液上机测定.
衍生. 另取配制好的标准系列工作液各1.00mL到10mL的离心管中，与待衍生试样溶液同步进行
注：酱油等含其他氨基酸的群品进行衍生时可以适当提高衍生试剂浓度至4.5g/L.
5.4空白试验
除不加试样外，采取完全相同的分析步骤、试剂和用量，进行同批次操作.
5.5仪器参考条件
5.5.1色谱柱：C.250mm×4.6mm，5pm，或相当者.5.5.2流动相：A相：10mmol/L乙酸钠溶液：B相：乙晴.梯度洗脱程序见表1. 5.5.3流速：1.0 mL/min.5.5.4柱温；30℃.5.5.5检测波长：248nm.5.5.6进样体积：20pL.
表1梯度洗脱程序
时间 流动相A 流动相Bmin % %0 0 70 0 30 04 0 70 0 30 018 0 50 0 50 020 0 30 0 70 025.0 30 0 70 025.1 70 0 0°030 0 70 0 30 0
5.6标准曲线的制作
将衍生后的标准系列工作液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作液中Y氨基丁酸的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，y-氨基丁酸标准溶液的高效液相色谱图参见附录A中图A.1.
5.7试样溶液的测定
将试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准工作曲线得到试样溶液中Y氨基丁酸的质量浓度.如果含量超过标准工作曲线线性范围，试样溶液需要重新稀释后衍生测定.
6分析结果的表述
试样中y-氨基丁酸含量按式（1）计算：
式中：
X 试样中y-氨基丁酸的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； -试样待测液中y-氨基T酸的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）：P p 空白溶液中y-氨基丁酸的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）：v 试样定容体积，单位为毫升（mL）：1000-单位换算系数； f 稀释倍数；试样的质量，单位为克（g）.计算结果保留三位有效数字.
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
8其他
取样量1g，定容体积50mL 方法检出限为15.0mg/kg，定量限为50.0mg/kg.
第二篇Y-氨基丁酸原料中Y氨基丁酸的测定液相色谱法
9原理
时间定性，外标法定量. 试样用水溶解，丹磺酰氯在碱性环境下衍生，衍生物经反相C色谐柱分离，紫外检测器检测，保留
10试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
