中华人民共和国国家标准
GB/T 36204-2018
chromatography-mass spectrometry method
中国国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由中国石油和化学工业联合会提出.
本标准由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会（SAC/TC105）归口.
本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、上海化工研究院有限公司、云南省化工产品质量监督检验站、贵州省产品质量监督检验院、河南省化工研究限公司、黑龙江省质量监督检测研究院、临沂市产品质量监督检验所、山东农大肥业科技有限公司.
本标准主要起草人：张娟、段路路、桂素萍、苏本玉、陈蕾、翰福龙、钟宏波、窦兴霞、朱海荣、丁方军、陈萌、杜秀明、洪丽玲.
高效液相色谱-质谱联用仪法 肥料中赤霉酸含量的测定
1范围
本标准规定了用高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定肥料中赤霉酸的含量.本方法赤霉酸的检出限为0.1mg/kg，定量限为0.5mg/kg. 本标准适用于水溶肥料、复混肥料（复合肥料）、掺混肥料等肥料中赤霉酸含量的测定.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
样品用甲酸-甲醇溶液和甲酸溶液超声提取，以甲酸-甲醇溶液和甲酸溶液作为流动相使用C为填料的不锈钢色谱柱，用高效液相色谐-三重四级杆串联质谱仪进行测定，外标法定量.
4试剂和材料
4.1一般规定：本标准中所用的试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂.本标准中所使用的
水，在未说明规格时，应符合GB/T6682中的一级水规格.4.2甲醇：色谱纯4.4甲酸-甲醇溶液：准确移取1.0m1甲酸（4.3），用甲醇（4.2）稀释至1L. 4.3甲酸：色谱纯4.5甲酸溶液：准确移取1.0mL甲酸（4.3），用水稀释至1L.4.6初始流动相：甲酸-甲醇溶液（4.4）和甲酸溶液（4.5）以1：9的比例混合均匀，现配现用.4.7赤霉酸标准品（Gibberellicacid，CAS号为77-06-5）：分子式：C，HO.相对分子质量：346.38. 纯度≥99.0%.4.8赤霉酸标准储备溶液：准确称取赤霉酸标准品（4.7）0.1g（精确0.1mg），置于100mL容量瓶中，配现用.
5仪器与设备
5.1高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）. 5.2涡旋混合器.
GB/T 36204-2018
5.3超声波清洗器.
5.4高速离心机：转速高于8000r/min.5.5电子天平：感量0.1mg.5.6有机相微孔滤膜；0.22pm5.7离心管：50mL 5.8实验室常用玻璃仪器.
6测定步骤
6.1平行试验
做两份试料的平行测定.
6.2样品预处理
称取1g~2g（精确至0.1mg）样品置于50mL离心管中，加人20mL初始流动相（4.6）.用涡旋混层清液至25mL容量瓶并用初始流动相（4.6）定容，摇匀后，取适量样品溶液经0.22μm有机相微孔滤 合器均质1min后，室湿下超声30min，放置于转速为8000r/min的离心机内离心5min，转移全部上膜过滤，待测.
6.3高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪参考条件
6.3.1液相色谱参考条件：
a）色谱柱：Cx（2.1mm×50mm，1.7μm）或相当者；b）柱温：30℃；c）样品室温度：15C；d）流动相：流动相A-甲酸-甲醇溶液（4.4）和流动相B-甲酸溶液（4.5），高效液相色谱梯度 洗脱条件见表1：e）流速；0.3 mL/min;f）进样量：5.0pL.
表1高效液相色谱梯度洗脱条件
流动相A含量/%时间/min 0 10 流动相B含量/% 901.5 10 903 0 60 407.5 90 109 0 10 9012.0 10 90
6.3.2质谱参考条件：
a）离子源：电喷雾离子源（ESI）；b）扫描模式：负离子扫描；c）检测方式：多反应监测模式（MRM）； d）离子源温度：550C或相当；
e）雾化气、气帘气，辅助气、碰撞气均为高纯氮气（纯度≥99.999%）；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，其他参考条件参见附录A.
6.4测定
6.4.1标准工作溶液的配制
准确移取0mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL赤霉酸标准工作溶液（4.9）分别置于10 mL容量瓶中，用初始流动相（4.6）定容，配制的标准工作溶液的浓度依次为0ng/mL、10ng/mL、 20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mlL、200 ng/mL.测定前配制.
6.4.2定性测定
按6.3的仅器条件对标准工作溶液和试液进行分析，根据样品色谱峰的保留时间与标准品的保留时间相对照，样品与标准品保留时间的相对偏差不大于5%；样品特征离子与标准品各特征离子相对 照，样品特征离子的相对丰度与标准品的相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判定样品中含有赤霉酸.
表2定性测定时相对离子丰度最大允许偏差
相对离子丰度/% >50 >20 ~~50 >10~20 ≤10允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50
6.4.3定量测定
采用外标法定量测定，在仪器最佳工作条件下，测定标准工作溶液，以峰面积为纵坐标，对应的标准工作溶液的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线.赤霉酸标准物质的提取离子质谱图参见附录B中的 图 B.1.
取样品待测液，按照6.3仅器条件进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物响应值均应在仅器测定的线性范围之内.
6.5空白试验
除不加试料外，均按上述操作步骤进行.
7结果计算
赤霉酸的含量X，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算：
式中：
（.-由标准曲线得到样品中赤霉酸的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)：co"-由标准曲线得到空白试验中赤霉酸的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V样品溶液（或稀释后）的总体积，单位为毫升（mL）；D样品稀释倍数；m-样品质量，单位为克（g）.计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留三位有效数字.
