中华人民共和国国家标准
GB/T 37873-2019
General assessment of quality evaluation for synthesized genes
中国国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
目次
前言1范2规范性引用文件3术语和定义4质量要求4.1总则 4.2纯度4.3总量4.4完整性4.5序列一致性5评价方法5.1样品与试剂 5.2纯度检测5.3总量检测5.4完整性检测5.5序列一致性检测附录A（资料性附录） 合成基因电泳图附录B（资料性附录）琼脂糖凝胶电泳检测方法
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.
本标准由国家标准物质研究中心提出并归口.
华大基因科技有限公司、青岛华大基因研究院. 本标准起草单位：深圳华大生命科学研究院（原深圳华大基因研究院）、中国计量科学研究院、深圳
本标准主要起草人：王云、王晶、沈玥、傅博强、赵宏翠、龚剑辉、陈泰、刘心、杜佳婷、谢强、牛春艳.
合成基因质量评价通则
1范围
本标准规定了合成基因的术语和定义、质量要求、评价方法.本标准适用于基于生物化学合成的合成基因（100bp~20kb)DNA的质量评价.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T34796-2017水溶液中核酸的浓度和纯度检测紫外分光光度法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
合成基因synthesized gene
3.2
DNA 测序DNA sequencing
用的方法有桑格-库森法和马克萨姆-吉尔伯特法等. 对DNA分子的核苷酸排列顺序的测定，也就是测定组成DNA分子的A、T、G、C的排列顺序.常
[JJF 1265-2010 定义 5.17]
序列比对sequence alignment 比较两个或两个以上核苷酸或者氨基酸序列间相似性的过程.[GB/T29859-2013 定文2.2.1]
3.3
4质量要求
4.1总则
合成基因的DNA序列，在符合国际基因合成联盟（IGSC）生物安全要求条件下，其质量要求，包括DNA纯度、总量、完整性与序列一致性.
4.2纯度
在pH值为7.0~8.5条件下，OD/OD的比值在1.8~2.0之间，且OD/OD≥2.0，符合
GB/T34796-2017中8.3.2的要求.
4.3总量
合成基因IDNA的总质量，不低于客户需求.一般不低于1μg.
4.4完整性
合成基因DNA完整性，反映了合成基因DNA的降解情况.经琼脂糖凝胶电泳检测，电泳图中明亮条带大小与目标条带一致，且亮度集中程度高，明亮条带间的亮度低，表明DNA完整性高.
合成基因主要包括线性的合成基因片段与环状的合成基因质粒两种类型，要求如下：
a）合成基因片段：条带单一，无其他杂质条带：b）合成基因质粒：存在目标条带且条带明亮.酶切后，存在与合成基因DNA大小一致的条带，参见附录A，
4.5序列一致性
合成基因DNA的测序序列与设定序列完全匹配.
5评价方法
5.1样品与试剂
5.1.1样品
基于生物化学合成的合成基因样品，应于一20℃贮存.
5.1.2试剂
实验室使用的试剂为不含DNA酶的分析纯化学试剂或生化试剂.实验室配制的试剂应有明晰标识，包括试剂名称、浓度、配制时间等.
5.2纯度检测
采用分光光度法测定合成基因DNA的ODODOD.OD测量值范围应为0.05~1.0：当不在此范围时，应对合成基因DNA溶液进行稀释或浓缩以达到检测值范围.
首先用溶解合成基因样品相同的缓冲液（如去离子水、TE缓冲液）校正紫外分光光度计，分别在230 nm260 nm 和280nm 波长下调零.取2μL样品，测定230 nm 260nm和280nm 波长下吸光值. 根据测量值计算260nm光密度与280nm光密度的比值（OD/OD）和260nm光密度与230nm光密度的比值（OD/OD）.
在分光光度纯度分析中，核酸在260nm处达到最大吸收峰，蛋白质、其他多糖杂质分别在280nm和230nm处有最大吸收峰，根据OD/OD和OD/OD的值估计DNA样品的纯度.高纯度DNA的OD/OD值为1.8~2.0，OD/OD大于或等于2.
5.3总量检测
根据分光光度计测得的OD，按照式（1）计算样本中DNA的质量浓度（o），按照式（2）计算样本中DNA 总质量（n).
式中：
pDNA的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
N样本稀释倍数；
F转换因子，双链DNA转换因子为50μg/mL
（2)
