中华人民共和国国家标准
GB/T 35803-2018
Determination of prohibited urocanic acid and its ethyl ester in cosmetics-High performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由中国轻工业联合会提出.本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口.本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所. 本标准主要起草人：马强、郭项雨、王超、杨海峰、操卫、李海玉、王志娟、沈敏.
引言
本标准的被测物质是我国《化妆品安全技术规范》规定的禁用物质.
禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质.《化妆品安全技术规范》规定：若技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时，应进行安全性风险评估，确保在正常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害.
目前我国尚未规定这些物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法.
化妆品中禁用物质尿刊酸及其乙酯的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了化妆品中禁用物质尿刊酸及其乙酯的高效液相色谱测定方法.本标准适用于膏霜类、水剂类、唇膏类、散粉类、香波类化妆品中尿刊酸及其乙酯的测定.本标准对尿刊酸及其乙酯检出限为2mg/kg，定量限为5mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样经溶剂超声提取后离心，上清液经氮吹定容过滤后，以高效液相色谱进行测定，外标法定量，液相色谱-质谱确认.
4试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1甲醇：色谱纯.4.2四氢映响.4.3氯化钠.4.4四丁基澳化铵.4.5尿刊酸标准品：分子式CHNO，CAS号104-98-3，纯度不小于98%，中文名称、英文名称、相对 分子质量、结构式参见附录A中表A.14.6尿刊酸乙酯标准品：分子式CHNOCAS号27538-35-8，纯度不小于97%，中文名称、英文名称、相对分子质量、结构式参见附录A中表A.1.4.710%甲醇水溶液：量取10mL甲醇（4.1）和90mL水，混匀后备用.4.80.005mol/L四丁基溴化铵溶液：准确称取四丁基澳化铵（4.4）0.805g（精确至0.0001g），置于 500mL容量瓶中.用水溶解并定容至刻度.4.9尿刊酸及其乙酯标准储备液：分别称取尿刊酸标准品（4.5）及尿刊酸乙酯标准品（4.6）各10mig（精确至0.0001g），分别置于10mL容量瓶中，用10%甲醇水溶液（4.7）溶解并定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1000mg/L的标准储备液，于4℃保存，可使用三个月.10mL容量瓶中，用10%甲醇水溶液（4.7）稀释至刻度，该溶液中尿刊酸及其乙酯的浓度均为100mg/L
5仪器和设备
5.1高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器.5.3分析天平：感量为0.0001g和0.001g. 5.2液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS）仪：配有电喷雾离子源（ESI）.5.4离心机：转速不低于8000r/min.5.5超声波清洗器.5.6氮吹仪.5.7具塞塑料离心管：10mL. 5.8带刻度氮吹管：10ml.5.9微孔滤膜：0.45μm，材质为聚四氟乙烯.
6分析步骤
6.1样品处理
6.1.1膏霜类、水剂类、散粉类及香波类样品
称取0.2g（精确至0.001g）试样置于10mL具塞塑料离心管（5.7）中，加入10mL甲醇（4.1），摇匀，超声提取20min，8000r/min离心15min，将上清液转移至带刻度氮吹管（5.8）中，缓慢氮吹至1mL，加人9mL水，混匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，供高效液相色谱测定.
6.1.2唇膏类样品
称取0.2g（精确至0.001g）试样置于10mL具塞塑料离心管（5.7）中，加人0.5mL四氢映响（4.2），再加入9.5mL甲醇（4.1) 摇匀，超声提取20min，8000r/min离心15min，将上清液转移至带刻度氮吹管（5.8）中，缓慢氨吹至1mL，加人9mL水，混匀，经0.45um微孔滤膜过滤，供高效液相色谱测定.
6.2测定条件
高效液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：XTerra MSC5μm 250mm×4.6mm（内径），或相当者；b）流速：1.0 mL/min;c）流动相：甲醇0.005mol/L四丁基溴化铵溶液=3070（体积比）； d）检测波长：285nm；e）柱温：35℃；）进样量：10pl.
6.3标准曲线的绘制
用10%甲醇水溶液（4.7）将尿刊酸及其乙酯混合标准储备液（4.10）逐级稀释得到浓度为0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mig/L、10 mg/L的混合标准工作溶液，按6.2的测定条件浓度依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，绘制标准工作曲线.
尿刊酸及其乙酯标准品的色谱图参见附录B中图B.1，尿刊酸及其乙酯标准品的紫外吸收光谱图参见附录B中图B.2.
