中华人民共和国国家标准
GB 31614.4-2026
食品安全国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
食品安全国家标准
食品中吡咯并喹啉醌二钠盐的测定
1范围
本标准规定了食品中吡略并喹啉配二钠盐含量的液相色谱测定方法. 本标准第一篇适用于食品中毗咯并喹啉限二钠盐含量的测定.本标准第二篇适用于吡略并喹啉配二钠盐原料中毗咯并喹啉醒二钠盐含量的测定.
第一篇食品中吡略并喹啉醒二钠盐的测定液相色谱法
2原理
试样中的吡略并喹啉配二钠盐经提取液提取，超滤离心管离心净化，采用反相C液相色谱柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，外标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1乙晴（CHCN）：色谱纯.3.1.2十二水合磷酸氢二钠（NaHPO12HO）.3.1.3二水合磷酸二氢钠（NaH:PO2HO）.3.1.4四丁基溴化铵（CHBrN）：色谱纯.3.1.5磷酸二氢钾（KHPO ）：色谱纯. 3.1.6氢氧化钠（NaOH）：色谱纯.3.1.7二水合乙二胺四乙酸二钠（CHNNaO2HO）.
3.2试剂配制
3.2.1提取液：称取2.26g十二水合磷酸氢二钠和1.98g二水合磷酸二氢钠用水溶解，并稀释至 1 000mL 混匀.3.2.2氢氧化钠溶液（1.0mol/L)：称取4.0g氢氧化钠用水溶解，并稀释至100mL，混匀.钾，加人800mL水超声溶解，用氢氧化钠溶液（1.0mol/L)调pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀.1 000mL，混匀. 3.2.4乙二胺四乙酸二钠溶液（10g/L）：称取10g二水合乙二胺四乙酸二钠用提取液溶解，并稀释至
GB 31614.4-2026
3.3标准品
毗咯并喹啉醒二钠盐（CHNNaO，CAS号：122628-50-6）：纯度99%的标准品或其溶液.
3.4标准溶液配制
3.4.1吡咯并喹啉配二钠盐标准储备液（1000mg/L）：准确称取毗咯并喹啉醒二钠盐标准品50mg（精确至0.1mg），加乙二胺四乙酸二钠溶液（10g/L）2mL，用提取液溶解，转移至50mL棕色容量瓶，用提取液稀释并定容，配制得质量浓度为1000mg/L的标准储备液.0℃～4C保存，有效期3个月.
3.4.2吡略并喹琳配二钠盐标准中间液（100mg/L)：准确吸取吡咯并唑啉配二钠盐标准储备液10.0mL于100mL棕色容量瓶中.加乙二胺四乙酸二钠溶液（10g/L)4mL.用提取液稀释并定容，混 匀，配制成质量浓度为100mg/L的标准中间液.0℃C～4C保存，有效期2个月.
3.4.3吡咯并唑啉配二钠盐标准系列工作液：分别吸取吡略并座琳配二钠盐标准中间液1.00ml、5.00mL和10.0m1于100mL棕色容量瓶中.加人乙二胺四乙酸二钠溶液（10g/L）4mL.用提取液稀释并定容，混匀，配制成质量浓度分别为1.00mg/L.、5.00mg/L、10.0mg/1.的吡略并唑啉醒二钠盐标准工作液.分别吸取吡略并喹啉醒二钠盐标准溶液（1.00mg/L)1.00mL.、5.00mL于10mL棕色容量 瓶中，加人乙二胺四乙酸二钠溶液（10g/L）0.4mL.用提取液稀释并定容，混匀.配制成质量浓度分别为0.100mg/L0.500mg/L的毗咯并喹啉觀二钠盐标准工作液.吸取毗咯并喹啉醒二钠盐标准溶液（0.100mg/L）4.00mL于10mL棕色容量瓶中，加入乙二胺四乙酸二钠溶液（10g/L）0.4mL，用提取液稀释并定容，混匀，配制成质量浓度为0.0400mg/L的毗喀并喹啉配二钠盐标准工作液.吡咯并喹琳醒二钠盐标准系列工作液的质量浓度分别为0.0400mg/L、0.100mg/L、0.500mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L10.0mg/L.临用现配
3.5材料
3.5.1离心管：50mL.3.5.2超滤离心管：15mL，截留分子量10ku，聚醚矾超滤膜，或相当者.
4仪器和设备
4.1液相色谱仪：配紫外检测器.4.3高速离心机：转速不小于12000r/min. 4.2天平：感量为0.1 mg和0.001 g.4.4均质器.4.5高速粉碎机.4.6超声波清洗器.4.8pH计：精度0 01. 4.7涡旋混合器.
5分析步骤
5.1试样的制备与保存
质后混匀.固体样品用高速粉碎机粉碎或研钵研磨成粉状后混匀.糖果等样品需经过一18C冷冻处 均匀性液体样品直接混匀含气样品使用前超声除气.不均匀性液体样品、半固体样品用均质器均2
理后经高速粉碎机粉碎或剪碎混匀.试样处理后装人洁净容器中，密封并做好标记置于0C～4C冷藏保存.
5.2试样前处理
5.2.1液体试样
称取2g（酱油试样称取0.5g，精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加人30mL提取液和2mL乙二胺四乙酸二钠溶液（10g/L），涡旋混匀，置于超声波清洗器中超声提取20min，全部转移至50mL 容量瓶中，用提取液稀释并定容，混匀，取2mL样液于超滤离心管中，4500r/min离心5min，离心液供液相色谱测定，
5.2.2半固体、固体试样
称取0.5g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加人30mL提取液和2mL乙二胺四乙酸二钠溶液（10g/L）.涡旋混匀，置于超声波清洗器中超声提取20min.全部转移至50mL容量瓶中，用提取液稀释井定容，混匀，全部转移至50mL离心管中，12000r/min离心3min，取2mL样液于超滤离心管中，4500r/min离心5min，离心液供液相色谱测定.
注：糖果试样的提取应置于超声波清洗器中50℃下超声提取20min.
5.2.3空白试验
除不加试样外，采取完全相同的分析步骤、试剂和用量，进行同批次操作.
5.3仪器参考条件
5.3.1色谱柱：C柱，柱长150mm.内径4.6mm，粒径5μm，或相当者.5.3.2流动相：流动相A：四丁基溴化铵-磷酸二氢钾混合溶液（pH7.4），流动相B：乙晴.梯度洗脱程序见表1.5.3.4流速 :1.0 mL/min. 5.3.3柱温：35℃5.3.5检测波长：250nm.5.3.6进样量：20pl.
表1梯度洗脱程序
时间 min 流动相A % 流动相B %0 0 67 333 5 67 333 6 20 806 0 20 806 1 67 3310 0 67 33
5.4标准工作曲线的制作
将标准系列工作液分别注人液相色谱仅中，测定相应的峰面积，以标准系列工作液中毗略并喹啉醒二钠盐的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线.吡略并唑啉配二钠盐标准溶液的液相色谱图参见附录A中图A.1.
5.5试样溶液的测定
将试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准工作曲线得到待测液中哦咯并喹啉配二钠盐的质量浓度.如果待测物质含量超过标准工作曲线范围，需对试样溶液稀释后进行检测.
6分析结果的表述
试样中吡略并喹啉配二钠盐的含量按式（1）计算：
式中：
X 试样中毗咯并喹啉醒二钠盐的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：一试样空白溶液中哦咯并噬啉醒二钠盐的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）： 试样溶液中晚咯并喹哪醒二钠盐的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）：P v 试样的定容体积，单位为毫升（mL）：f 稀释倍数；1000-单位换算系数；一试样的取样量，单位为克（g）.计算结果保留三位有效数字.
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
8其他
液体试样：取样量为2g，定容至50mL，吡咯并喹啉配二钠盐方法检出限为0.30mg/kg，方法定量限为1 0 mg/kg;
酱油、半固体、固体试样：取样量为0.5g定容至50mL.吡略并喹啉醒二钠盐方法检出限为1.2 mg/kg，方法定量限为 4.0mg/kg.
第二篇吡咯并唑啉醒二钠盐原料中吡咯并喹啉醒二钠盐的测定液相色谱法
9原理
试样中的毗略并喹啉醒二钠盐干燥至恒重后，经乙晴水溶液溶解，采用反相C液相色谱柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，外标法定量.
