SN
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 1109-2002
新城疫微量红细胞凝集抑制 试验操作规程
Procedure of haemagglutination-inhibition test for Newcastle disease
2002-05-20发布2002-11-01实施
中华人民共和国发布 国家质量监督检验检疫总局
SN/T1109-2002
前言
本标准等效采用国际兽医局的标准《诊断方法和疫苗标准手册》2000年，第四版），并参考中华人 民共和国进出境动物检疫规程手册编写、制定。
本标准的附录A、附录B为标准的附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：胡永强、单松华。
本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
新城疫微量红细胞凝集抑制 SN/T 1109-2002 试验操作规程
Procedure of haemagglutination-inhibition test forNewcastledisease
1范围 本标准规定了禽类新城疫微量红细胞凝集抑制试验方法。
本标准适用于禽类新城疫红细胞凝集抑制抗体水平的检测。
2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均 为有效。
标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
国际兽疫局《诊断方法和疫苗标准手册》（2000年，第四版） 3仪器设备、试剂和材料 试剂均为分析纯。
3.1器材 普通天平、分析天平、普通离心机、V型血凝板、微型振荡器、50uL可调移液器、恒温箱、塑料采血 管等。
3.2试剂 磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、葡萄糖、柠檬酸钠、蒸馏水。
3.3稀释液 pH7.0或至pH7.40.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS)的配制（见附录A标准的附录）。
3.4新城疫标准抗原 由指定单位供应，或用标准新城疫（ND)毒株尿囊腔接种9～11日龄无特定病原体（SPF）鸡胚，收 集尿囊液灭活制备抗原。
3.51%鸡红细胞 采集SPF鸡或无新城疫血凝抑制抗体的成年鸡血，放入等量的阿氏液（见附录B标准的附录）中， 用20倍体积的PBS洗涤3～4次，每次以2000r/min离心3～4min，最后一次5min，用PBS配成1% 悬液。
4C保存悬液，在72h内使用完。
3.6血清 3.6.1标准阳性/阴性血清：由指定单位供应。
3.6.2被检血清：采、送的样品。
样品以1000r/min离心5min，吸出血清待用。
若需较长时间保存血清，可置于4C或一20C。
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-05-20批准2002-11-01实施
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4操作方法 4.1微量血凝试验（见表1） 表1微量血凝试验操作术式单位：μL 孔号123456789101112 滴度（logz）1234567891011对照 PBS252525252525252525252525 抗原（倍比稀释）252525 PBS252525252525252525252525 1%鸡红细胞252525252525252525252525 作用时间及温度18℃～20℃，静置40min左右 判定举例++++|++++ ++++|++++ ++++++++++++++++++ 4.1.1在微量血凝板上，自第1列孔至第12列孔，每孔加25pLPBS，共加四排。
4.1.2吸取一定倍数稀释的抗原25μL加于第1列孔，充分混合后移出25μL至第2列孔，依次类推 做等量倍比稀释至第11列孔，第11列孔弃去25μL。
4.1.3设立第12列孔为红细胞对照。
4.1.4每孔再加25μLPBS。
4.1.5每孔各加人1%鸡红细胞悬液25μL。
4.1.6立即置微型振荡器上混合1min，或手持血凝板绕圆圈混匀。
4.1.7置37C静置15min～20min，或室温（18℃～25℃）静置40min左右，或4C静置60min（如果 环境温度太高时）。
4.1.8结果判定：期间观察数次，直至对照的红细胞全部沉淀（此时为一个圆点）。
将血凝板倾斜，观察 红细胞有无泪珠样流挂，根据血凝图像判定结果。
HA效价高于2"时可继续增加稀释的孔数。
以出现完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝滴度（红细胞无泪珠样流挂），该血凝滴度代表 了一个血凝单位，再根据初始稀释度计算抗原的血凝单位。
4.1.94个血凝单位的标定：根据4.1.8测定的抗原的血凝效价，计算4个血...
