中华人民共和国国家标准
GB/T 36825-2018
Detection and identification of Eobania vermiculata(Miller 1774)
中国国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口
本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国张家港出入境检验检疫局.
本标准主要起草人：王沛、周卫川、崔俊霞、陆军、肖琼.
蠕虫尹氏蜗牛检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了蟠虫尹氏蜗牛Eobnia vermiculata（Muller，1774）检疫鉴定的方法原理、器具与试剂、现场检疫、实验室鉴定、结果评定以及标本处理和保存.
本标准适用于端虫尹氏蜗牛的检疫鉴定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注文件的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
SN/T3067-2011软体动物常规检疫规范 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
SN/T3067-2011界定的以及下列术语和定义适用于本文件.
3.1矢囊dart sack蜗牛雌性生殖系统中一个藏有1枚或多枚骨针的肌肉质的囊状结构.
3.2恋矢love dart 矢囊中钙质或壳质的骨针.注：为蜗牛交配的刺激器官.
首管diverticulum
受精囊柄分枝形成的空管状结构.
3.4
鞭状体flagellum
蜗牛雄性生殖系统中的附器，由阴茎本体末端延伸形成.注：位于阴茎本体和输精管交接处后面的部分.
4方法原理
蟠虫尹氏蜗牛主要随运输工具、种苗和污染的货物远距离传播.该蜗牛为杂食性的有害生物，不需要特定的寄主植物，凡接触过地面的物品都有可能是污染源.传播方式和传播途径是确定现场检疫的依据.贝壳、螺体、生殖系统形态特征和线粒体细胞色素C氧化酶亚基1（C（1）基因序列是实验室鉴定的主要依据，蜗虫尹氏蜗牛相关信息参见附录A
5器具与试剂
5.1器具
5.1.1体视显微镜：10×以上.5.1.2故大镜， 5.1.3手电筒，5.1.4塑料自封袋：5”、8°.5.1.5广口标本瓶：500mL，5.1.6孔径土壤筛：4mm. 5.1.7小铁铲.5.1.8游标卡尺.5.1.9白瓷盘.5.1.10培养Ⅲ.5.1.11摄子. 5.1.12剪刀.5.1.13显微镊子.5.1.14显微剪刀.5.1.15微针.5.1.17标签. 5.1.16解剖蜡盘.5.1.18移液枪:2.5μL，10μL，20μL，100pL，200μL，1 000μL5.1.19微型离心机.5.1.20PCR仪. 5.1.21离心管：1.5mL.5.1.22PCR反应管：0.2mL5.1.23恒温金属浴.
5.2试剂
除另有规定外，试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中相关规定.5.2.175%乙醇.5.2.2无水乙醇.5.2.3硫酸镁. 5.2.4动物基因组DNA提取试剂盒.5.2.52×PCR预混合液（2×Taq PCR MasterMix）.5.2.6双蒸水.
6现场检疫
对来自疫区的集装箱、木质包装材料必须重点检查，仔细观察集装箱的底部和四角部位以及所装货物与木质包装材料是否有蜗牛.对来自疫区的原木、盆景、苗木、水果等未经加工的植物性原材料也应认真检查，对可能被蜗牛污染的物品可用高压水枪冲洗后再检查，蜗牛爬行过后，一般都会留下银灰色 的丝带状黏液痕迹，这是判定是否有蜗牛污染的重要依据.发现蜗牛，随时装入塑料自封袋或标本瓶带2
回实验室做进一步的检验鉴定.发现盆景等携带土壤或其他细碎衬垫材料时，需过筛检查是否有卵或幼螺.
7实验室鉴定
7.1测量观察
和螺的形态特征. 用游标卡尺测量蜗牛贝壳的壳高和壳宽、卵粒长和宽.用肉眼或放大镜或体视显微镜仔细观察卵
7.2尹氏蜗牛属EobaniaHesse，1915鉴定特征
体一般比阴茎和阴蒸本体短.本属贝壳形态与耳螺属OralaSchumacher，1817相似，但前者壳口简 贝壳大型，圆球形，螺旋部低矮.受精囊具有延伸的盲管，其长度超过受精囊柄.矢囊很小.鞭状单、口缘白色或接近棕色，外唇反折锋利；面后者壳口有时有齿、口缘内侧深褐色，外唇反折、增厚、不锋利.
7.3端虫尹氏蜗牛签定特征
7.3.1卵
白色，横风形，长短径约为3mm×4.1mm.
7.3.2贝壳
7.3.2.1成螺
贝壳呈低矮圆球形，相当坚固，有4个～5个螺层，各螺层适度膨胀.体螺层圆形，在前方强烈向下倾斜.壳面颜色多变，从黄白色到褐色，常有色带或斑点，呈蜡虫状，一般有4条～5条深褐色条带，螺旋部色带常断裂成为一系列的斑点.体螺层腹面在色带和脐孔之间的区域为淡白色.壳口和口缘白24mm，壳宽22mm～32mm.贝壳大小有地理分布上的差异，如在希腊的Gavdos岛，壳高可达 色，口缘外折反卷.胚螺层光滑.次螺层有许多发达的锻锤状的雕刻.贝壳无脐孔.壳高14mm～24.5 mm~33.5 mm（参见附录 B中图 B.1).
7.3.2.2幼蝶
幼螺贝壳外形与成螺基本相似但口缘不外折脐孔狭窄且开放生长螺脐孔部分被轴唇外折所遮盖，至成螺时脐孔完全闭合.
7.3.3螺体
浅褐色腹足背部颜色较深，至腹部逐渐变为淡黄色（参见附录B中图B.2）.
7.3.4生殖系统
7.3.4.1生殖系统解割
将麻醉或闷杀（见9.1）处理后的标本，剥去外壳，将软体固定在蜡盘上，在体视显微镜下，从头部的体右侧找到生殖孔.解剖从生殖孔开始，先用显微剪刀沿生殖孔外围一阉剪开体壁，然后从背部纵向轻轻剪开体壁肌肉.仔细辨认外生殖器的各种结构，尤其要注意阴茎牵引肌和输精管及受精囊的辨认.最后将生殖系统从体腔中分离出来.
