ICS65.020.30 B41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T37746—2019 草鱼呼肠孤病毒三重RT-PCR检测方法 Triplex RT-PCR assay for detection of grass carp reoviruses 2019-06-04发布 2020-01-01实施 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T37746-2019 引言 本文件的发布机构提请注意如下事实，声明符合本文件时，可能涉及到第7章“操作步骤”和附录“引 物”与《用于诊断草鱼呼肠孤病毒的三重PCR检测引物组、试剂盒及方法》（专利号：ZL201210039379.8)等 相关专利的使用. 本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场. 该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下， 就专利授权许可进行谈判.该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案.相关信息可以通过以下 联系方式获得： 专利持有人：中国水产科学研究院珠江水产研究所 地址：广州市荔湾区西塑兴渔路1号珠江水产研究所 请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专 利的责任. GB/T37746—2019 草鱼呼肠孤病毒三重RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了3种不同基因型草鱼呼肠孤病毒的三重RT-PCR检测技术. 本标准适用于对草鱼的3种基因型呼肠孤病毒的核酸进行检测与分离株的鉴定. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件. DEPC:焦炭酸二乙酯(diethypyrocarbonate) dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxy-riboncleoside triphosphate) EB:溴化乙锭(ethidium bromide) GCRV:草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus) M-MLV RT:莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶(moloney murine leukemia virus reverse tran- scriptase) PBS:磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution) PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction) RNA:核糖核酸(ribonucleic acid) RNase inhibitor:RNA酶抑制剂 RT-PCR:逆转录-聚合酶链式反应(reverse-transcription polymerase chain action) Tag DNA polymerase:Tag DNA聚合酶 三重RT-PCR:三重逆转录-聚合酶链式反应(triplex reverse transcriptase polymerase chain reac- tion) 4技术原理 草鱼呼肠孤病毒(GCRV)现有I、Ⅱ和Ⅲ型3个基因型，根据同一基因型不同毒株之间共有的保守 序列分别设计特异性引物，这些引物可以特异性扩增相对应基因型分离株的核酸，而不能扩增其他基因 型分离株的核酸.在同一聚合酶链式反应(PCR)反应体系里加入针对3个基因型的3对保守引物，便 可同时扩增出3个大小有差异的核酸片段，可以通过琼脂糖凝胶电泳的...
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