ICS65.020.01 B16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T36820-2018 甘蔗条纹花叶病毒实时荧光反转录聚合酶 链式反应(RT-PCR)检测方法 Detection method of Sugarcane streak mosaic virus by real-time reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR) 2018-09-17发布 2019-04-01实施 国家市场监督管理总局 中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T36820-2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口. 本标准起草单位：福建农林大学国家甘蔗工程技术研究中心、农业部甘蔗及制品质量监督检验测试 中心、农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室. 本标准主要起草人：高三基、黄美婷、傅华英、孙生仁、张慧丽、王锦达、陈如凯. GB/T36820-2018 甘蔗条纹花叶病毒实时荧光反转录聚合酶 链式反应(RT-PCR)检测方法 1范围 本标准规定了甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus)实时荧光反转录聚合酶链式反 应(RT-PCR)检测方法的仪器与设备、试剂与材料、样品的采集与前处理、检测以及结果判断与表述等. 本标准适用于可能带有甘蔗条纹花叶病毒的活体寄主植物的快速检测、诊断. 2缩略语 下列缩略语适用于本文件. CP:外壳蛋白(coat protein) Ct值：实时荧光PCR反应中，每个反应管内的荧光信号达到设定的阔值时所经历的循环数(cycle threshold) cDNA:与RNA链互补的单链DNA(plementary DNA) Ex Tag HS酶：热启动DNA聚合酶(hot start DNA polymerase) FAM:6-羧基荧光素(6-carboxy-fluorescein) PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction) RNA:核糖核酸(ribonucleic acid) RT-PCR:反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction) SCSMV:甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus) TAMRA:6-羧基四甲基罗丹明(6-carboxytetramethylrhodamine) Tip:吸头 3方法原理 根据甘蔗条纹花叶病毒CP基因序列设计一对仅在该病毒CP基因间保守的特异性引物和一条特 异性的荧光双标记水解型寡核苷酸探针(TaqMan探针).首先利用反转录酶将病毒RNA反转成 cDNA 再以cDNA为模板在同一反应管内连续进行实时荧光PCR扩增反应，水解型寡核苷酸探针 (TaqMan探针)的荧光信号强度伴随着目标序列PCR扩增产物的增加呈正比关系，通过收集PCR扩 增过程的荧光信号值，即可判断试样是否带有目标序列.甘蔗条纹花叶病信息参见附录A. 4仪器与设备 4.1实时荧光PCR检测仪：激发/检测波长范围350nm~750nm;可用荧光染料(SYBR Green I)和水 解型寡核苷酸探针(TaqMan探针)；升降温速度≥2.0℃/s;均一性/一0.5℃；准确性/一0.3℃；温 度范围4℃~100℃. 4.2核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计. 4.3电子天平：感量0.01g. 1 ...
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