ICS11.220 B41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T27539—2011 动物流感检测A型流感病毒 通用荧光RT-PCR检测方法 Animal influenza detection-Method of real-time RT-PCR for detection of influenza virus A 2011-11-21发布 2012-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T27539-2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口， 本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫 局、深圳匹基生物工程有限公司. 本标准主要起草人：汪琳、林志雄、周琦、高志强、陈茹、乔彩霞、蒲静、杨伟、梁成珠. I GB/T27539—2011 动物流感检测A型流感病毒 通用荧光RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了A型流感病毒通用荧光RT-PCR检测的操作方法. 本标准适用于活动物及其产品中A型流感病毒的检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 SN/T1330进出口生、熟毛皮检验规程 3缩略语 下列缩略语适用于本文件. Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阅值时所经历的循环数(Ct value) DEPC:焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate) PBS:磷酸盐缓冲液（配方见附录A)(phosphate buffer saline) RNA:核糖核酸(ribonucleic acid) RT-PCR:反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction) 4原理 流感病毒(influenza virus)属正粘病毒科，根据抗原特性及其基因特性的不同，流感病毒分为甲 (A)、乙(B)、丙(C)型.乙型变异性较弱、丙型抗原性比较稳定，仅感染人类；甲(A)型抗原变异性最强， 感染人类和其他动物，常引起世界性大流行.编码基质蛋白的M基因是A型流感病毒共有且较保守. 采用Taqman技术，针对M基因中特定序列，合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针，探 针的5'端标记报告荧光基团(R) 3'端标记淬灭荧光基团(Q).在PCR退火阶段，一对引物和一条探针 同时与目的基因片段结合，探针上R基团发出的荧光信号被Q基团所吸收，仪器检测不到R所发出的 荧光信号；在PCR延伸阶段，Taq酶在引物的引导下沿着模板链合成新链，当链的延伸进行到探针结合 部位时，受到探针的阻碍而无法继续，Taq酶发挥5'-→3外切核酸酶的功能，将探针水解成单核苷酸，标 记在探针上的R基团就游离出来，R所发出的荧光不为Q所吸收而被检测仪所接收，随着PCR反应的 进行，PCR产物量与荧光信号呈现正比关系， ...
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