ICS11.220 B41 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T7211-2011 传染性脾肾坏死病毒检测方法 Detection method of infectious spleen and kidney necrosis virus 2011-09-01发布 2011-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 SC/T7211-2011 传染性脾肾坏死病毒检测方法 1范围 本标准规定了采用间接荧光抗体技术(IFAT)和聚合酶链式反应技术(PCR)检测传染性脾肾坏死 病毒(ISKNV)的方法. 本标准适应于传染性脾肾坏死病毒病的流行病学调查、诊断、检疫和监测. 本标准可检测包含ISKNV在内的肿大细胞病毒属病毒，包括真鲷虹彩病毒(RSIV)、条石鲷虹彩病 毒(RBIV)、斜带石斑鱼虹彩病毒(OSGIV)等；但不能检测虹彩病毒科其他属病毒. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18088出入境动物检疫采样 SC/T7014水生动物检疫实验技术规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 传染性脾肾坏死病毒ISKNV infectious spleen and kidney necrosis virus 传染性脾肾坏死病毒是虹彩病毒科肿大细胞病毒属的代表种.该病毒为一种胞质型双链DA病 毒，呈二十面体对称结构，病毒颗粒直径约150nm 基因组大小111032bp.该病毒感染敏感细胞，可引 起一定程度的皱缩、坏死等细胞病变(CPE);感染鳜和多种海、淡水养殖鱼类，引起脾脏和肾脏肿大、坏 死，鳃发白、呈缺血状的淡红色，肝脏苍白等症状. 该病毒的主衣壳蛋白(MCP major capsid protein)是高丰度结构蛋白，约占ISKNV蛋白总量的 40%.虹彩病毒MCP基因具有高度的保守性，是虹彩病毒进行系统分类的主要依据.MCP基因也是 对虹彩病毒进行分子诊断的常用靶基因. 4试剂和材料 4.1水 符合GB/T6682中一级水的要求. 4.2 ISKNV参考株和ISKNV的DNA 由有资质的动物病原微生物菌（毒）种保藏机构提供. 4.3敏感细胞株 鳜仔鱼细胞系(MFF-1)或其他敏感细胞系、株，由有资质的实验室提供. 4.4Mab(2D8) 抗ISKNV单克隆抗体，由有资质的实验室提供，一-20℃保存. 4.5FTC标记的羊抗鼠IgG 商品化试剂，一20℃保存. SC/T7211-2011 4.6基因组DNA提取试剂盒 商品化试剂盒，按说明书要求保存. 4.7Taq酶 一20℃保存，避免温度剧烈变化. 4.8 dNTP 一20℃保存，含dCTP、dGTP、dATP、dTTP各10mmol/L. 4.9引物 一20℃保存.其序列如下：上游引物F:5'-CGT GAG ACC GTG CGT AGT-3';下游引物R:5'- AGG GTG ACG GTC GAT ATG-3'.使用时浓度均为20MoL/L. 4.10DNA分子量标准(Marker) 推荐使用DL2000 各片段大小依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp和100bp.也可使 用DNA ladder100 各片段大小M依次为1500bp、1000bp、900bp、800bp、700bp、600bp、500bp、400 bp、300bp、200bp和...
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