GB 中华人民共和国国家标准 GB31610.2—2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中异尖线虫的检验 2023-09-06发布 2024-03-06实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 国家市场监督管理总局 GB31610.2-2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中异尖线虫的检验 1范围 本标准规定了动物性水产品及其制品中异尖线虫(Anisakidae)幼虫的形态学和PCR检验方法. 本标准适用于动物性水产品及其制品中异尖线虫幼虫的检验. 2原理 动物性水产品及其制品中的异尖线虫幼虫主要寄生于海洋鱼类、甲壳类、软体类动物的肌肉和脏器 表面等组织内.解剖分离或用胃蛋白酶消化动物性水产品及其制品的肌肉或脏器等组织获得虫体，根 据幼虫的形态特征，判断异尖线虫科幼虫.对可疑虫体通过扩增异尖线虫核糖体DNA内转录间隔区 (ITS)基因片段并测序，进行常见异尖线虫幼虫的鉴定. 3仪器和设备 3.1生物显微镜：100×~400×. 3.2体视显微镜：7.5×~150×. 3.3PCR扩增仪. 3.4凝胶成像系统. 3.5电泳仪. 3.6恒温培养箱：37℃士1℃. 3.7高速离心机：转速≥12000r/min. 3.8网筛：孔径2mm(10目). 3.9锥形量杯：1000mL. 3.10微量移液器：0.2gL~2.5gL、1gL~10uL、10gL~100gL、100L~1000uLo 4试剂和材料 4.1试剂 4.1.1盐酸：36%~38%HC1溶液. 4.1.2生理盐水：0.85%NaCl溶液. 4.1.31mol/L.Tris-HCl溶液(pH8.0). 4.1.40.5mol/L EDTA溶液(pH8.0). 4.1.510%SDS溶液. 4.1.65mol/L NaCI溶液. 4.1.73000U/mg胃蛋白酶. 4.1.820mg/mL蛋白酶K. GB31610.2-2023 4.1.9苯酚/三氯甲烷/异戊醇(25：24：1). 4.1.105U/μL耐热DNA聚合酶. 4.1.1110XPCR缓冲液. 4.1.12 25 mmol/L MgCl2. 4.1.13 dNTPs:dATP、dTTP、dCTP、dGTP 每种浓度为2.5mmol/L 4.1.14琼脂糖：电泳级. 4.1.1550XTAE缓冲液：使用前用去离子水稀释成1×TAE缓冲液. 4.1.161XTE溶液(pH8.0) 4.1.1710mg/mL溴化乙锭(EB)或其他核酸染料. 4.1.186×上样缓冲液. 4.1.19100bp~2000 bp DNA分子量标准. 4.1.20PCR引物：浓度为20umol/L. 正向引物NC5:5'-GTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATT-3' 反向引物NC2:5'-TTAGTTTCTTTTCCTCCGCT-3' 扩增异尖线虫ITS基因片段长度为800bp~1100bp. 4.2试剂配制 4.2.1生理盐水：称取8.5gNaC1溶解于900mL去离子水，再加去离子水至1000mL 4.2.21mol/LTris-HC1溶液：称取121.1 g Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶解于800mL去离子水，用盐 酸调节pH至8.0，加去离子水至1000mL 4.2.30.5mol/L EDTA溶液：称取186.1gNa2EDTA2H2O(二水合乙二胺四乙酸二钠)溶解于 800mL去离子水，搅拌溶解，用NaOH调节pH至8.0，加去离子水至1000mL 4.2.45mol/1.NaCl溶液：称取292.5 g...
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