C53 ICS 67.050 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4959-2017 出口蜂蜜中-淀粉酶的测定 液相色谱法 Determination of -- -amylase in export honey LC method 2017-11-07发布 2018-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
SN:T4959-2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009和GB/T20001.4给出的规则起草。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：陆慧媛、费晓庆、张晓燕、陈雷、姜珊、李静静、吴斌、张睿、沈崇钰、 丁涛、陈惠兰、赵增运。
S
SN:T4959-2017 出口蜂蜜中-淀粉酶的测定 液相色谱法 1范围 本标准规定了出口蜂蜜中-淀粉酶的液相色谱-紫外检测方法。
本标准适用于出口蜂蜜中y-淀粉酶的测定。
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 蜂蜜样品用乙酸钠缓冲溶液溶解后，加人底物对硝基苯基-β-D-麦芽三糖进行酶解反应，Y-淀 粉酶将底物酶解为酶解产物对硝基苯-β-D-葡萄糖，采用液相色谱-紫外检测器测定，利用酶解产物 质量与-淀粉酶的线性关系，外标法定量。
4试剂和材料 除非另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
4.1乙晴：HPLC级。
4.2乙酸钠。
4.3乙酸。
4.4对硝基苯-β-D-麦芽三糖：纯度≥99%，CAS号56846-39-0。
4.5-淀粉酶标准品：70U/mg，纯度≥99%。
4.60.1mol/L乙酸钠缓冲液（pH值4.50）：称取乙酸钠（4.2）8.2g，加适量水溶解，用乙酸（4.3） 调pH值为4.50，最后定容至1000mL。
4.71.0mg/mL-淀粉酶标准储备溶液：准确称取适量的淀粉酶标准品（4.5），用水溶液配成 1.0mg/mL的标准储备液。
储备液贮存在0℃~4℃冰箱中。
4.80.01mg/mLy-淀粉酶标准中间溶液：用水将淀粉酶标准储备溶液（4.7）稀释成浓度为 0.01mg/mL标准中间溶液，储备液贮存在0℃~4℃冰箱中。
4.95.0mg/mL对硝基苯-β-D-麦芽三糖反应溶液：准确称取适量对硝基苯-β-D-麦芽三糖（4.4）， 用水溶解配成5.0mg/mL的反应溶液，于-18C冰箱中保存。
4.10滤膜：0.45μm，水相。
5仪器 5.1液相色谱仪：配有二极管矩阵检测器。
SN/T4959-2017 5.2分析天平：感量为0.1mg和0.0lg各一台。
5.3涡旋混匀器。
5.4pH计。
5.5恒温水浴振荡器。
5.6具塞塑料离心管：50mL。
6试样的制备与保存 未结晶的样品将其用力搅拌均匀，有结晶析出的样品可将瓶盖塞紧后，置于40℃的水浴中温热， 等样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。
在融化时应注意防止水分挥发。
试样于室温下保存。
7测定步骤 7.1提取 准确称取2.0g（±0.05g）蜂蜜样品于50mL具塞塑料离心管（5.6），加适量0.1mol/L乙酸钠缓 冲液（4.6）溶解并定容到5mL。
7.2酶解 于上述样品溶液中加入0.1mL对硝基苯-β-D-麦芽三糖反应溶液（4.9），摇匀后放入55C恒温 水浴振荡器（5.5）中反应90min，反应结束后将上述溶液吸出，过水系0.45μm的滤膜（4.10），待 进样检测。
7.3标准工作溶液的配制 取5个干净具塞塑料离心管（5.6），分别加入2.8uL、5.5μuL、14.5μL、28.5L、57μL和145μL的 0.01mg/mL-淀粉酶标准中间溶液（4.8），然后用0.1mol/L乙酸钠缓冲液（4.6）定容至5mL，各标 准工作溶液的浓度分别对应于1U/kg、2U/kg、5U/kg、10U/kg、20U/kg和50U/kg。
按照步骤7.2进 行处理。
7.4测定 7.4.1液相色谱-紫外检测条件 液相色谱-紫外检测条件如下： a）色谱柱：Cg色谱柱，5μum,150mmx4.6mmi.d或相当者； b）流动相：乙晴一水（15+85，V/V）； c）流速：1.0mL/min; d）柱温：室温； e）进样量：10μL; f）紫外检测波长：310mm。
7.4.2液相色谱－紫外测定 按照7.4.1的色谱条件测定样品溶液和标准...
