中华人民共和国国家标准
GB 5009.247-2025
食品安全国家标准 食品中纽甜的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准代替GB5009.247-2016《食品安全国家标准食品中纽甜的测定》.本标准与GB5009.247-2016相比，主要变化如下：一修改了样品前处理方法： 修改了标准的适用范围；一增加了第二法液相色谱-串联质谱法.
食品安全国家标准 食品中纽甜的测定
1范围
本标准规定了食品中纽甜的液相色谱和液相色谱-申联质谱测定方法.本标准适用于食品中纽甜的测定.
第一法液相色谱法
2原理
试样用混合提取液提取，含胶基试样经水浴溶解、高脂肪试样经正已烷脱脂，蛋白沉淀剂沉淀蛋白，固相萃取净化后液相色谱仪测定，保留时间定性，外标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1甲醇（CHOH）：色谱纯.3.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯.3.1.3三乙胺（CH;N).3.1.4乙酸铵（CHCOONH）：色谱纯.3.1.6亚铁氰化钾[KFe（CN）.3HO]. 3.1.5冰乙酸（CHCOOH）：色谱纯.3.1.7乙酸锌[Zn(CHCOO）;2HO].3.1.8 氨水（NHHO）.3.1.9正已烷（CH）.
3.2试剂配制
3.2.1甲酸-三乙胺缓冲液：分别吸取0.8mL甲酸和2.5mL三乙胺，加水定容至1L.pH约为4.5.3.2.3混合洗脱液：量取甲醇700mL至1L容量瓶，用甲酸-三乙胺缓冲液定容至刻度. 4.5，转移至1L容量瓶，用甲酸-三乙胺缓冲液定容至刻度.容至1L.3.2.5亚铁氰化钾溶液（92g/L）：称取106g亚铁氰化钾，加人适量水溶解，用水定容至1L.3.2.6乙酸锌溶液（183g/L)：称取220g乙酸锌，加入适量水溶解，加人30mL冰乙酸，用水定容至1L.
GB 5009.247-2025
3.2.7氨水溶液（20%）：量取200mL氨水至1L容量瓶，用水定容至刻度.
3.3标准品
纽甜标准品（CHNO，CAS号：165450-17-9）：纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液（1.00mg/mL）：准确称取100mg（精确至0.0001g）标准品，甲酸-三乙胺缓冲液溶解并定容至100mL.4C下避光保存，有效期3个月.3.4.2标准工作液：分别吸取适量标准储备液（1.00mg/mL).用甲酸-三乙胺缓冲液配制成质量浓度为 0.500 μg/mL、1.00 μg/mL~5.00 μg/mL、10.0 μg/mL、50.0 μg/mL 和l 100 μg/mL 系列标准工作液 临用现配.
3.5.1固相萃取柱：500mg/6mL，聚苯乙烯吡略烷酮聚合物填料，或性能相当者. 3.5.2微孔滤膜；有机系，0.45pm
4仅器和设备
4.2天平：感量分别为0.01g和0.0001g. 4.1高效液相色谱仪：带紫外检测器或二极管阵列检测器.4.3pH计：精度为0.01.4.4涡旋混合器.4.5离心机；转速≥4000r/min.4.6氮吹仪. 4.7超声波清洗器.4.8粉碎机4.9水浴锅.4.10固相萃取装置，
5分析步骤
5.1试样前处理
5.1.1试样制备
液态试样摇匀待提取；基质均匀的半固态试样和粉状试样待提取，其他样品需匀浆或粉碎均匀待提取，制备好的试样0℃~5℃保存待检测.
5.1.2试样提取
5.1.2.1含胶基的糖果、果冻及鸡精等试样
准确称取5g试样（精确到0.01g）于50mL离心管中，加人25mL混合提取液，于60C水浴振荡30min.冷却至室温，用甲酸或氨水溶液（20%）调pH至4.5，超声30min，加人1mL亚铁氰化钾溶 2
液（92g/L）和1mL乙酸锌溶液（183g/L)，涡旋混匀，4000r/min离心5min.上清液经滤纸过滤并转移至50mL容量瓶.残渣加人20mL混合提取液，振荡5min，4000r/min离心5min，上清液经滤纸过滤合并，用混合提取液定容至刻度，作为试样提取液待净化.
5.1.2.2油脂类调味料、巧克力及奶油等试样
准确称取5g试样（精确到0.01g）于50mL离心管中，加人25mL混合提取液，于60℃水浴振荡30min.加5mL正已烷，振荡5min，4000r/min离心5min，弃去正已烷层.之后的操作同5.1.2.1“用甲酸或氨水溶液（20%）调pH至4.5"后续步骤.
5.1.2.3其余试样
准确称取5g试样（精确到0.01g）于50mL离心管中，加人25mL混合提取液，涡旋5min.之后的操作同5.1.2.1"用甲酸或氨水溶液（20%）调pH至4.5"后续步骤.
5.1.3试样净化
过固相萃取柱，5mL甲酸-三乙胺缓冲液淋洗，弃去全部流出液.用8mL混合洗脱液洗脱，收集洗脱 固相萃取柱使用前依次用6mL甲醇和6mL水活化，保持柱体湿润.取10.0mL上述试样提取液液于60℃水浴氮吹浓缩至约1mL，用甲酸-三乙胺缓冲液定容至2.0mL，作为试样溶液待上机测定.
5.2仪器参考条件
5.2.1色谱柱：C，150mm×4.6mm.5m，或相当者.5.2.2柱温：30C5.2.3流动相：A相为甲醇：B相为乙酸铵溶液（20mmol/L）.梯度洗脱程序见表1.5.2.4流速：1.0mL/min.5.2.6进样量：50pl. 5.2.5检测波长：210mm.
表1流动相洗脱参考梯度
时间/min 流动相A/% 流动相B/%0 00 10 904 00 60 4020 00 60 4020 01 25 00 10 9010 90
5.3标准曲线的制作
将系列标准工作液分别注入液相色谱仪，测定相应的峰面积.以系列标准工作液中纽甜的浓度为横坐标，以峰面积的响应值为纵坐标，绘制标准曲线.纽甜标准溶液的色谱图见附录A中图A.1.
5.4试样溶液的测定
将试样溶液经0.45um滤膜过滤后注人液相色谱仪.保留时间定性，峰面积定量，根据标准曲线得到试样溶液中纽甜的浓度.
