化妆品舒缓功效测试方法 基于体外肥大细胞的脱颗粒抑制率及组胺 释放量检测
Testingmethod for the soothing function ofcosmeticsinvitromast cellbased assayof degranulation Inhibition and histaminerelease
上海市预防医学会发布
目次
前言2规范性引用文件 范围术语和定义4原理5仪器和设备6主要试剂及耗材7试验方法8结果计算9试验有效性判定11结果相关性解读 10结果报告.附录A（资料性） 溶液制备附录B（资料性） 肥大细胞脱颗粒状态图片示例
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
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本文件由上海市预防医学会提出并归口.
本文件起草单位：上海市疾病预防控制中心、广东博溪生物科技有限公司、德之馨香精香料（南通）有限公司、浙江养生堂天然药物研究限公司、云南贝泰妮生物科技集团股份有限公司、片仔癫（上海）生物科技研发有限公司、时垠（上海）生物科技有限公司、北京鑫金证国际技术服务有限公司、常州 请美生物科技有限公司、东阿阿胶股份有限公司、上海海关技术中心、南方医科大学皮肤病医院、上海家化联合股份有限公司、上海嘉亨日用化学品有限公司、上海测谱检测技术有限公司、上海其然生物科技有限公司、上海永熙信息科技有限公司.
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本文件为首次制定.
化妆品舒缓功效测试方法基于体外肥大细胞的脱颗粒抑制率及组 胺释放量检测
1范围
本文件规定了小鼠肥大细胞细胞系P815脱颗粒抑制率检测和体外鼠源腹腔肥大细胞组胺含量检测的方法.
本文件适用于化妆品舒缓功效的测试评价. 市预
2规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件.
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
肥大细胞mast cell
产生于骨髓造血于细胞，随血流迁移到特定的组织中，并在特定环境下进行局部增殖并分化成熟.
3.2
肥大细胞脱颗粒mast celldegranulation
肥大细胞的一种功能状态，是超敏反应发生的基础.
3.3
组胺histamine
强效的炎性介质，是动植物体内的一种生物胺，其主要由肥大细胞和嗜碱性粒细胞分泌.
4原理
血管-免疫炎症的生理过程，通过舒缓皮肤炎症反应可以改善皮肤刺激等问题.肥大细胞是一种重要的 具有舒缓功效的化妆品有助于改善皮肤刺激等状态.皮肤刺激状态的发生主要涉及皮肤屏障-神经免疫细胞，非免疫性刺激（如C48/80、黄蜂毒素、神经肽P物质等），可以触发肥大细胞脱颗粒，释放组胺、白三烯等生物活性介质.这些炎症介质作用在皮肤上会引起平滑肌收缩和微血管通透性升高，造成组织损伤和变态反应.通过抑制肥大细胞脱颗粒和释放组胺等炎性介质，可以起到改善皮肤刺激状态，达到舒缓的功效.
T/SPMA
使用非免疫性刺激物C48/80诱导肥大细胞，触发细胞脱颗粒现象，采用计数法测定脱颗粒细胞数量，计算受试物的脱颗粒抑制率，通过与阴性对照组的比较，评价受试物的舒缓功效.
使用神经肽P物质（substanceP SP）刺激腹腔肥大细胞促使其细胞脱颗粒并释放大量组胺，收集细胞培养上清，采用竞争性酶免疫分析法检测受试物作用细胞后对组胺释放量的抑制作用，评价受试物的 舒缓功效.
5仪器和设备
5.2CO培养箱：37C，饱和湿度、5%CO/空气.5.3倒置显微镜.5.4离心机.5.5调节移液枪：1000uL、200L、50L、10L5.6细胞计数仪. 5.7 酶标仪：配置450nm光片5.8超净工作台.
5.1分析天平：精度0.1mg-
6主要试剂及耗材
除另有规定外，试剂均为分析纯，与细胞培养相关试剂、耗材均需经过无菌处理.
6.1细胞
ATCC），组胺释放量检测选用小鼠原代分离所获腹腔肥大细胞.如果培养条件能满足细胞的特殊需要， 脱颗粒抑制率检测选用小鼠肥大细胞瘤细胞P815（建议细胞株来源于关国典型物质保藏中心，其他肥大细胞也可用于本试验，但应证明其等同性.
6.2细胞培养涉及试剂及耗材
高糖DMEM培养液、新生牛血清、细胞培养瓶、台式液、KM小鼠、重组小鼠干细胞因子、重组小鼠IL-3、RPMI1640培养基、percoll细胞分离液、甲苯胺蓝染色液.
6.3检测涉及试剂及耗材
附标准品）.
7试验方法
7.1脱颗粒抑制率检测
7.1.1细胞准备
将冷冻保存的细胞培养物以一个合适的密度接种到培养液，并在检测前至少传代一次.细胞应以合适的密度接种到培养液中用于试验，细胞接种密度应保证在接种12h后，融合度达到45%~60%.
7.1.2受试物准备
