NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 4488-2025
Determination of melatonin in oilseed--Liquid chromatography-tandemmass spectrometry
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任.
本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口.
本文件起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室（武汉）、农业农村部油料及制品质量监督检验测试中心.
本文件主要起草人：张良晓、马飞、汪雪芳、喻理、王秀嫔、李培武.
油料中褪黑素含量的测定液相色谱串联质谱法
1范围
本文件规定了植物源农产品中褪黑素含量的液相色谱申联质谱测定方法.本方法检出限为0.3g/kg，定量限为1.0μg/kg. 本文件适用于芝麻、大豆、花生等植物源性油料产品中褪黑素含量的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文
件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
试样中的褪黑素，用甲醇提取，经固相萃取柱净化，用高效液相色谱申联质谱仪检测，外标法定量.
5试剂与材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.5.1甲醇（CHOH，CAS号：67-56-1).5.2甲酸铵（CHNO，CAS号：540-69-2）：色谱级.5.3甲酸（HCOOH，CAS号：64-18-6)：色谱级. 5.4褪黑素标准品（CNHOCAS号：73-31-4）：纯度不小于95%.5.5甲醇水溶液（119，体积比）.5.6甲醇水溶液（73.体积比）.5.7甲醇水溶液（82.体积比）.5.8甲酸铵甲酸甲醇溶液（5mmol/L甲酸铵0.1%甲酸）：称取甲酸铵（5.2）0.315g，加人1mL甲酸5.9甲酸水溶液（0.1%）：准确吸取1mL甲酸（5.3）于1000mL容量瓶中.用水稀释并定容至 （5.3），用甲醇稀释并定容至1000mL.1 000 ml 5.10褪黑素标准储备溶液：精密称取10.0mg褪黑素标准品（5.4）.用甲醇溶解，并完全转移至10mL棕色容量瓶中，定容，配制成浓度为1mg/mL的标准储备溶液，一18C以下避光保存，有效期2个月.5.11褪黑素标准中间溶液：准确移取标准储备溶液（5.10）1mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容，配制5.12褪黑素标准工作溶液：分别吸取一定量的标准中间溶液（5.11）.用甲醇稀释成浓度分别为 成浓度为10μg/mL的标准中间溶液，4C以下避光保存，有效期1个月.1 ng/mL 2 ng/mL 5 ng/mL 10 ng/mL 20 ng/mL 50 ng/mL 100 ng/mL 200 ng/mL 500 ng/mL )标准工作溶液，临用现配.5.13C18固相萃取小柱：1000mg.6mL，或性能相当者.5.14微孔滤膜：0.22μm如疏水PTFE滤膜或相当者.
NY/T 4488-2025
6仪器和设备
6.1液相色诺申联质诺仪：配有电喷雾离子源（ESI）. 6.2天平：感量0.1 mg 和 0.01 g.6.3离心机：转速不低于为4200r/min.6.4组织搞碎机.6.5涡旋振荡器.6.6氮吹仪.6.7超声波萃取仪.6.8固相萃取装置.
7试样制备
取适量的待测样品，用组织捣碎机将其捣碎成粉末状（其中花生样品需要预先切片再捣碎），然后立即连续完成分析规程.
8分析步骤
8.1提取
称取5g（精确至0.01g）试样至50mL离心管中，加人20mL甲醇至离心管，涡旋1min，室温下避光静置24h后，剧烈振荡15min，室温超声提取 30min.4 200r/min 离心5min，吸取10 mL上清液，氮吹干后用2mL甲醇水溶液（5.5）复溶，待净化.
8.2净化浓缩
1mL/min，将上述待净化液（8.1）全部加人固相萃取柱中，用10mL的甲醇水溶液（5.5）淋洗，弃去淋洗 将C18固相萃取柱放置在固相萃取仪上依次用10mL甲醇和10mL水活化，控制流速为液，然后将5mL的甲醇水溶液（5.7）加人固相萃取柱中，5mL玻璃离心管收集洗脱液，40C水浴中氮气吹至近干，用0.5mL的甲醇水溶液（5.6）复溶，涡旋30s后过微孔滤膜（5.14），待上机测定.
8.3测定
8.3.1液相色谱条件
a）色谱柱：C18色谱柱（100mm×2.1mm，1.7pm），或相当者.b）柱温：30℃c）流动相：A为有机相，甲醇（5mmol/L甲酸铵0.1%甲酸）（5.8）；B为水相，0.1%甲酸水溶液(5. 9).d）流速：0.20mL/min. e）进样量：3gL.f）梯度洗脱程序见表1.
表1梯度洗脱程序
时间，min A.% B.%0 10 902 10 905 80 2010 80 90 2012 15 10 10 90
