中华人民共和国国家标准
GB 15193.15-2015
食品安全国家标准 生殖毒性试验
中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会 发布
前言
本标准代替GB15193.15-2003（繁殖试验》.本标准与GB15193.15-2003相比，主要变化如下： 一标准名称修改为食品安全国家标准生殖毒性试验”；增加了“试验的解释”内容. 修改了"试验报告"内容：
食品安全国家标准 生殖毒性试验
1范围
本标准规定了生殖毒性试验的试验方法和技术要求.本标准适用于评价受试物的生殖毒性作用.
2术语和定义
2.1生殖毒性
对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和对后代的有害影响.生殖毒性既可发生于妊娠期，也可发生于妊前期和哺乳期.表现为外源化学物对生殖过程的影响，例如生殖器官及内分泌系统的变化，对性周期和性行为的影响，以及对生育力和妊娠结局的影响等.
2.2爱育毒性
个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前（包括胚期、胎期以及出生后）出现的有害作用，表现为发育生物体的结构异常、生长改变、功能缺陷和死亡.
2.3母体毒性
受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，甚至死亡.
3试验目的和原理
凡受试物能引起生殖机能障碍，干扰配子的形成或使生殖细胞受损，其结果除可影响受精卵及其着床而导致不孕外，尚可影响胚胎的发生及发育，如胚胎死亡导致自然流产、胎仔发育迟缓以及胎仔畸形.如果对母体造成不良影响会出现妊娠、分娩和乳汁分泌的异常，也可出现胎仔出生后发育异常.
4试验方法
4.1受试物
受试物应使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理.将受试物掺入饲料、饮用水或灌胃给予.
4.2实验动物
实验动物的选择应符合国家标准和有关规定.首选大鼠，选用7周龄～9周龄，试验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的土20%.试验前动物在实验动物房应至少进行3d～5d环境适应和检
疫观察.每组应有足够的雌鼠和雄鼠配对，产生约20只受孕雌鼠.为此，一般在试验开始时两种性别每组各需要亲代（F.代）大鼠30只；在继续的试验中用来交配的各代大鼠L子一代（F代）、子二代（F：代）以及子三代（F，代）每种性别每组需要25只（至少每窝雌雄各取1只，最多每窝雌雄各取2只）.选用的F.代雌鼠应为非经产鼠、非孕鼠.
4.3剂量及分组
动物按体重随机分组，试验为至少设三个受试物组和一个对照组，应考虑受试物特性（如生物代谢和生物蓄积特性）的影响作用.如果受试物使用溶媒，对照组应给予溶媒的最大使用量.如果受试物引起动物食物摄人量和利用率的下降时，那么对照组动物需要与试验组动物配对喂饲.某些受试物的高 剂量受试物组设计应考虑其对营养素平衡的影响，对于非营养成分受试物剂量不应超过饲料的5%.
在受试物理化和生物特性允许的条件下，最高剂量应使F.代动物出现明显的毒性反应，但不引起动物死亡；中间剂量可引起轻微的毒性反应：低剂量应不引起亲代及其子代动物的任何毒性反应（可按最大未观察到有害作用剂量的1/30，或人体推荐摄入量的10倍）.
4.4实验动物处理
4.4.1受试物的给予
4.4.1.1试验期间，动物应采用相同的方式给予受试物；每日在同一时间段给予受试物，每周7d. 受试物应在交配前连续给予两种性别的各代大鼠至少10周，并继续给予受试物至试验结束，其中子代的雌鼠和雄鼠在断乳后每日给予.各代大鼠给予的受试物剂量（按动物体重给予，mg/kg体重或g/kg体重）饲料和饮水相同.
4.4.1.2根据受试物的特性或试验目的，选择合适的给予方式.首选掺入饲料，若受试物加人饲料或饮水中影响动物的适口性，则应选择灌胃给予受试物.
可使用植物油（如橄榄油、玉米油等），不溶于水或油的受试物可使用羧甲基纤维素、淀粉等配成混悬液或期状物等.受试物应新鲜配制，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外.应每日在同一时间灌胃1次，每周称体重2次，根据体重调整灌胃体积.灌胃体积一般不超过10mL/kg体重，如为水溶液时，最大灌胃体积可达20mL/kg体重：如为油性液体，灌胃体积应不超过4mL/kg体重：各组灌胃体积一致.
4.4.1.4受试物掺人饲料或饮水给予，要将受试物与饲料（或饮水）充分混匀并保证该受试物配制的稳定性和均一性，以不影响动物摄食、营养平衡和饮水量为原则，受试物掺人饲料比例一般小于质量分数的5%，若超过5%时（最大不应超过10%），可调整对照组饲料营养素水平（若受试物无热量或营养成分，且添加比例大于5%时，对照组饲料应填充甲基纤维素等，掺人量等同高剂量），使其与剂量组饲料营养素水平保持一致，同时增设未处理对照组；也可视受试物热量或营养成分的状况调整剂量组饲料营 养素水平，使其与对照组饲料营养素水平保持一致.受试物剂量单位是每千克体重所摄人受试物的毫克（或克）数，即mg/kg体重（或g/kg体重），当受试物掺入饲料其剂量单位也可表示为mg/kg（或g/kg）饲料，掺入饮水则表示为mg/mL水.受试物掺人饲料时，需将受试物剂量（mg/kg体重）按动物每100g体重的摄食量折算为受试物饲料浓度（mg/kg饲料）.
4.4.2交配
每次交配时，每只雌鼠应与从同一受试物组随机选择的单个雄鼠同笼（1：1交配），直到检测到阴栓，或者经过3个发情期或2周.查到阴栓后应将雌、雄鼠分开，如果经过3个发情期或2周还未进行
交配也应将雌雄鼠分开，不再继续同笼.配对同笼的雌雄鼠应作标记.雌鼠在交配期应每天检查精子或阴栓，直到证明已交配为止.查到阴栓的当天为受孕0d.预计已受孕的雌鼠应分开放人繁殖笼中，孕鼠临产时应提供筑巢的垫料.
4.4.3每窝仔鼠数量的标准化
将每窝仔鼠于出生后第4天调整至相同数量（每窝8只～10只），尽量做到每窝内雌、雄数量相等，也可以窝内雌、雄数量不等，但各窝之间两性别的鼠数应分别相同.原窝中多余的鼠应随机取出，面不应按体重选择.
4.4.4观察代数
观察代数随受检目的而异，可作一代、二代、三代或多代观察.如果在两代生殖试验中观察到受试物对子代有明显的生殖、形态或毒性作用，则需要进行第三代生殖毒性试验，进一步观察受试物的生殖毒性作用.
4.5一代、二代和三代生殖毒性试验法
4.5.1一代生殖毒性试验法
一代生殖毒性试验示意图见图1.
图1一代生殖毒性试验示意图
4.5.2两代生殖毒性试验法
4.5.2.1两代生殖毒性试验示意图见图2.
