中华人民共和国国家标准
GB 5009.209-2026
食品安全国家标准 食品中玉米赤霉烯酮的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
与GB5009.209-2016相比，主要技术变化如下：修改了方法的适用范围： 增加了同位素内标-液相色诺-质谱/质谱法；修改了试样制备和试样提取；删除了荧光光度法.
食品安全国家标准
食品中玉米赤霉烯酮的测定
1范围
本标准规定了食品中玉米赤霉烯酬的测定方法.本标准第一法液相色谱法和第二法同位素内标-液相色谱-质诺/质谱法适用于食品（动物性食品除外）中玉米赤霉烯酮的测定.本标准第三法液相色谱-质谱/质谱法适用于动物性食品中玉米赤霉烯酮的测定.
第一法液相色谱法
2原理
试样经乙晴水溶液提取，免疫亲和柱净化，液相色谱-荧光检测器检测，外标法定量，
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1乙晴（CHCN).3.1.2氯化钠（NaCl）.3.1.3磷酸氢二钠（NaHPO）（或十二水磷酸氢二钠，NaHPO12HO）. 3.1.4磷酸二氢钾（KHPO）.3.1.5氯化钾（KCI）.3.1.6盐酸（HCI).3.1.7吐温-20（CHO）3.1.8乙晴（CHCN）：色谱纯. 3.1.9甲醇（CHOH）：色谱纯.
3.2试剂配制
3.2.21mol/L盐酸溶液：量取8.3mL盐酸，倒入90mL水中，混匀后加水至100mL 3.2.190%乙晴溶液：量取10mL水，用乙晴稀释至100mL，混匀.酸二氢钾，0.20g氯化钾，用900mL水将上述试剂溶解，测试溶液pH，需要时，使用1mol/L盐酸溶液调节pH值与免疫亲和柱相匹配，加水定容至1000mL，混匀.3.2.40.1%吐温-20-磷酸盐缓冲液（以下简称PBST）：量取1mL吐温-20 用磷酸盐缓冲液稀释至 1 000 mL，混匀.
GB 5009.209-2026
3.2.670%乙晴溶液：量取70mL乙晴，用水稀释至100mL，混匀. 3.2.585%乙晴甲醇溶液：量取85mL色谱纯乙晴，用色谱纯甲醇稀释至100mL，混匀.
3.3标准品
玉米赤霉烯酮（CHO，CAS号：17924-92-4）：纯度≥98.0%的标准品或其溶液.
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液（100μg/mL）：称取玉米赤霉烯酮标准品10mg（精确至0.01mg），用乙晴溶解井定容至100mL.一18℃及以下温度避光保存，有效期12个月.3.4.2标准中间液（1000ng/mL）：吸取玉米赤霉烯酮标准储备液1.00mL至100mL容量瓶中，用乙 晴定容至刻度.一18℃及以下温度避光保存，有效期3个月.3.4.3标准工作液（100ng/mL)：吸取玉米赤霉烯酮标准中间液10.00mL至100mL容量瓶中，用乙晴定容至刻度，临用现配.3.4.4标准系列工作液：移取标准工作溶液适量，用流动相配制成质量浓度分别为10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、200ng/mL的标准系列工作液.临用现配.
3.5材料
3.5.1免疫亲和柱：玉米赤霉烯酮柱容量≥1500ng，玉米赤霉烯酮柱回收率≥85%.3.5.2玻璃纤维滤纸：孔径1.6pm；或相当者.3.5.3针式微孔滤膜：孔径0.45μm，有机型：或相当者.
4仪器和设备
4.1液相色谱仪：配荧光检测器. 4.2电子天平：感量分别为0.01g和0.01mg.4.3高速粉碎机.4.4组织掐碎机.4.5匀浆机.4.6涡旋振荡器，转速≥1 000r/min 4.7高速均质器：转速6500r/min~24000r/min，4.8固相萃取装置：配真空泵，4.9氮吹仪.4.10pH计.4.11离心机：转速≥6000r/min，
5分析步骤
5.1试样制备与保存
5.1.1试样制备
检测用的样品量应大于1kg：当样品量不足1kg时，至少取同一批次的3个包装；缩分后取不低于0.5kg，其中，固体样品用高速粉碎机粉碎，半固体样品用组织捣碎机捣碎，液体样品用匀浆机匀浆，注1：对于高油脂含量额粒样品（如花生等）、柔韧性样品/高黏度样品（如绞子皮等）高糖样品（如葡萄干等）等特
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殊样品可以采取冷冻或加水匀浆（花生样品水一1：1.4-其他样品按1=1）等措施进行制样.注2：对干碳酸饮料或酒类等.可采取超声、搅择或抽真空等措施脱气后混匀.注3：根据检验目的可按实际情况取样制备.
5.1.2试样保存
制备后混合均匀的样品均分成约100g的多个包装，储存于洁净的容器内，密封后置于2℃～6℃C或一18C下避光保存.
5.2试样提取
玉米试样：称取10g试样（精确至0.01g）于离心管中，加人50.0mL90%乙猜溶液，置于涡旋振荡器提取20min（或用均质器均质3min），玻聘纤维滤纸过滤或6000r/min离心10min，取上清液备用.
高蛋白含量特殊膳食用食品试样：称取5g试样（精确至0.01g）于离心管中，加人25.0mL70%乙晴溶液，置于涡旋振荡器提取20min（或用均质器均质3min），玻璃纤维滤纸过滤或6000r/min离心 10 min，取上清液备用.
酱油、醋等试样：称取试样5g（精确至0.01g）于离心管中，加乙晴至25.0mL，混匀，置于涡旋振荡器提取20min（或用均质器均质3min），玻璃纤维滤纸过滤或6000r/min离心10min，取上清液备用.
其他试样：称取5g试样（精确至0.01g）于离心管中，加25.0mL90%乙晴溶液，置于涡旋振荡器提取20min（或用均质器均质3min），玻璃纤维滤纸过滤或6000r/min离心10min，取上清液备用.
注：高油脂含量颗粒样品、柔韧性样品/高瘤度样品、高糖样品等加水制备试样：称取12g于高心管中，使其中含有待测样品5g（精确至0.01g）.加43.0ml.乙精至试样中提取液（含样品制备添加水）为50 0mL.其他操作步骤同上.
5.3试样净化
吸取5.0mL上清液加人40mLPBST，混匀.若溶液浑浊，则6000r/min离心5min.
待免疫亲和柱恢复至室温，原有液体流尽后，以约1滴/s的流速将待净化的稀释液全部通过免疫亲和柱.稀释液流尽后依次用10mLPBST和10mL.水淋洗免疫亲和柱，弃去全部流出液，抽干亲和用氮气缓缓吹干，加人1.0mL流动相，涡旋混合30s溶解残留物，过针式微孔滤膜，收集滤液于进样瓶 柱内残余水.加人2mL甲醇至免疫亲和柱内进行洗脱，控制下滴速度1滴/s，收集洗脱液，在50C下中，待测.
注1：高油脂含量颗粒样品、柔韧性样品/高黏度样品、高糖样品等加水制备试样吸取10.0mL.酱油等基质较为复注2：使用不同厂商的免疫亲和柱、在样品上样、淋洗和洗脱的操作方面可能会略有不同，应按照供应商所提供的 杂的试样吸取1.0mL-其他操作步骤同上.操作说明书要求进行操作.注3：全自动或半自动的净化仅器可优化操作参数后使用.
5.4液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C柱（柱长150mm，内径4.6mm，填料粒径5pm），或等效柱；b）流动相：A相为水，B相为85%乙晴甲醇溶液； c）等梯度洗脱：A相为46%，B相为54%；d）流速：1.0mL/min;e）检测波长：激发波长274nm，发射波长440nm；f）进样量：50pL;g）柱温：室温.
