中华人民共和国国家标准
GB23200.109-2018
食品安全国家标准 植物源性食品中二氯吡啶酸残留量的测定 液相色谱-质谱联用法
National food safety standard-Determination of clopyralid in foods of plant origin
版 中华人民共和国农业农村部爱布
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食品安全国家标准 植物源性食品中草铵麟残留量的测定 液相色谱-质谱联用法
1范围
本标准规定了植物源性食品中草铵麟残留量的液相色谱-质谱联用方法.本标准适用于植物源性食品中草铵腾残留量的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量
3原理
试样中的草铵腾用水和甲醇提取，再经固相材料分散净化处理，净化液与氯甲酸-9-芬基甲酯(9-fluorenylmethyl chloroformate）反应后生成的衍生物草铵腾-FMOC（glufosinate-FMOC）经液相色诺-质谱联用法检测，外标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，在分析中仅使用分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1乙晴（CH CN.CAS号：75-05-8)：色诺纯. 4.1.2甲醇（CH OH.CAS号：67-56-1)：色谱纯.4.1.3乙酸铵（CHCOONH CAS号：631-61-8).4.1. 4硼酸钠（Na:B O:10H;O.CAS号：1303-964).4.1.5氯甲酸-9-基甲酯（C：HCIO，CAS号：28920-43-6）：纯度99.0%，0C~4°C保存.
4.2溶液配制
4.2.1硼酸盐缓冲溶液（50.0g/L.pH=9）：称取5g硼酸钠（NaB O10H:O)，用水溶解并定容至100 mL. 4.2.2氯甲酸-9-基甲酯乙晴溶液（10.0g/L）：称取1g氯甲酸-9-基甲酯，用乙晴溶解并定容至100 mL 4.2.3乙酸铵水溶液（5mmol/L）：称取0.385g乙酸铵溶解于适量水中，用水定容至1000mL.
4.3标准品
草铵腾（C;HN O P.CAS号：77182-82-2）标准品：纯度≥99.0%.
4.4标准溶液配制
4.4.1草铵腾标准储备溶液（100mg/L)：准确称取草铵麟标准品10.Omg于50mL.烧杯中，用水溶解后转移到100mL容量瓶中，并用水定容.放置于0℃C～4C冰箱，有效期6个月.
GB 23200.108-2018
4.4.2草铵腾标准中间溶液（10mg/L)：吸取5.0mL草铵腾标准储备溶液于50mL容量瓶中，用水定容.放置于0℃～4℃冰箱，有效期1个月.
4.5材料
4.5. 1中性氧化铝（Al O CAS 号：1344 28 - 1);0. 075 mm~0. 15 mm.4.5.2多壁碳纳米管（MWCNTs）:粒径范围10nm~20nm：颗粒物长度5pm~15μm：比表面积 (225±25)m²/ g.4.5.3滤膜；0.22pm，有机系.
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱联用仅：配有电喷雾离子源（ESI）.5.2分析天平：感量0.0001g、感量0.01g.5.4离心机：转速不低于10000r/min. 5.3组织捣碎仪.5.5涡旋振荡器.5.6恒温水浴锅.
6试样制备
小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处 蔬莱、水果和食用菌样品按相关标准取一定量，样品取样部位按照GB2763的规定执行.对于个体较理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放人组织捣碎机中捣碎成匀浆.匀浆放人聚乙烯容器中.
物、茶叶、坚果和香辛料样品各500g，粉碎后充分混匀，放人聚乙烯瓶或袋中. 取谷类样品500g，粉碎后使其全部可通过425μm的标准网筛，放人聚乙烯瓶或袋中.取油料作
植物油类搅拌均匀.
试样于一18℃以下温度保存.
7分析步骤
7.1提取
7.1.1蔬菜、水果、食用菌类
称取10g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，参见附录A补水，然后加人10mL甲醇（4.1.2），涡旋振荡2min后，以3800r/min离心5min，待净化.
7.1.2香辛料、茶叶类
涡族振荡2min后，以3800r/min离心5min，待净化. 称取2g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，参见附录A补水，然后加人10mL甲醇（4.1.2），
7.1.3谷物、坚果、油料作物、植物油类
称取5g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，参见附录A补水，然后加人10mL甲醇（4.1.2），涡旋振荡2min后，以3 800r/min离心5min，待净化.
7.2净化
7.2.1蔬菜、水果、坚果、食用菌类、香辛料、茶叶类、谷物类
准确吸取1mL提取液于称有5mg多壁碳纳米管（4.5.2）的2mL离心管中，涡旋1min后，以10000r/min离心3min-取上清液过0.22μm有机系滤膜（4.5.3）于另一个2mL离心管中，待衍生化.
7.2.2油料作物类
用吸量管准确吸取4mL提取液于5mL离心管中，置于-20℃的冰箱中冷冻过夜，然后取1mL上清液于称有5mg多壁碳纳米管（4.5.2）和50mg中性氧化铝（4.5.1）的2mL离心管中，涡旋1min后，以10000r/min离心3min，取上清液过0.22um有机系滤膜（4.5.3）于另一个2mL离心管中，待衍生化.
7.2.3植物油类
准确吸取1mL提取液直接过0.22μm有机系滤膜（4.5.3）于另一个2mL离心管中，待衍生化.
7.3衍生化
后再加入0.5mL氯甲酸-9-基甲酯乙晴溶液（4.2.2），涡旋1min，于40C水浴中衍生1h，衍生后以 10000r/min离心1min，取上清液过0.22pm有机系滤膜（4.5.3），供检测.准确吸取草铵腾标准溶液（7.5）0.5mL按此方法同时进行衍生化.
7.4仪器参考条件
7.4.1液相色谱参考条件
b）流动相：A为5mmol/L乙酸铵水溶液，B为乙晴，梯度洗脱程序见表1； a）色谱柱：Cs，50mm×2.1mm，粒径1.7pm，或相当者；c）流速：0.2mL/min；d）柱温：室温：e）进样体积：5l
表1流动相及梯度洗脱程序（VV）
时间 min 流动相V 流动相V.0 95 54 6 70 70 30 306. 1 5 958. 1 8 0 95 5 95 510 95 5
7.4.2质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源：b）扫描方式：正离子扫描； 喷雾电压：3500V：d) 毛细管温度：320℃：e) 气化温度：300℃；f）鞘气（N）：45 psi；g）辅助气（N）：10 psi； h）碰撞气氢气：1.5mTorr；i）检测方式：多反应监测（MRM），多反应监测条件见表2.
表2草铵瞬衍生物glufosinate-FMOC的保留时间和多反应监测（MRM）条件
中文名称 保留时间 定量离子对 定性离子对 碰能量min m/z 404 0/182 0 m/α 15 V草驿衍生物 5.5 404. 0/182. 0 404 0/208 0 10
7.5标准工作曲线
将草铵腾标准中间溶液用空白提取液稀释成质量浓度为0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L和1mg/L的系列基质匹配标准溶液，经衍生化（7.3）后按参考色谱和质谱条件测定.以草铵麟质量浓度为横坐标、其衍生物的峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数，基 质匹配标准溶液应现配现用.
7.6定性及定量
7.6.1保留时间
被测试样中草铵腾衍生物glufosinate-FMOC色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在土2.5%之内.
7.6.2定量离子、定性离子及子离子丰度比
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括1个母离子和2个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的2个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比其相对偏差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在草胺腾.
表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差
单位为百分率
相对离子丰度 20 ~50() 10~20(含) ≤10允许相对偏差 ±20 ±25 ±30 ±50
7.7测定
将基质匹配标准溶液和待测溶液经衍生化后分别注人液相色谱-质谱联用仪中，以保留时间和定性离子定性，样品中草铵腾质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内，超过标准工作曲线质量浓度上限的样品应稀释后进样，采用外标法定量.同时做空白试验.
7.8空百试验
除不加试样外，按照7.1～7.7的规定进行平行操作.
8结果计算
试样中草铵麟的残留量以质量分数w计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算.
≥ AXp.×v ...（1）A.×m
式中：
w试样中草铵麟残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A试样溶液中草铵麟衍生物的峰面积；P.-基质匹配标准工作溶液中草铵腾的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L)； A.标准溶液中草铵麟衍生物的峰面积；mm试样的质量，单位为克（g）；v-提取溶液总体积，单位为毫升（mL），=20.
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数字.当结果大于1mg/kg时保留3位有效数字.
9精密度
9.1在重复性条件下，2次独立测定结果的绝对差不大于重复性限（r）.重复性限（r）的数据为：
