中华人民共和国国家标准
GB23200.112-2018
食品安全国家标准
植物源性食品中9种氨基甲酸酯类 农药及其代谢物残留量的测定 液相色谱-柱后衍生法
National food safety standard-Deterrmination of 9 carbamate pesticides and metabolites residuesin foods of plant originLiquid chrormatography-post-column derivatization method
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食品安全国家标准 植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定 液相色谱-柱后衍生法
1范围
本标准规定了植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物（参见附录A）残留量的液相色诺-柱后衍生测定方法.
本标准适用于植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样用乙晴提取，提取液经固相萃取或分散固相萃取净化，使用带荧光检测器和柱后衍生系统的高效液相色谱仪检测，外标法定量.
4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1乙晴(CH CN CAS号：75-05-8).4.1.2甲醇（CHOH CAS号：67-56-1)：色谱纯.4.1.3二氯甲烷（CHCI，CAS号；75-09-2)：色谱纯. 4.1.4甲苯（CH，CAS号：108-88-3）：色谱纯.4.1.5氯化钠（NaC].CAS号：7647 -14-5).4.1.6邻苯二甲醛（C HO，CAS号：643-79-8).4.1.72-二甲胺基乙硫醇盐酸盐（C HCINS.CAS号：13242-44-9)，或相当者.4.1.8无水硫酸镁（MgSO CAS号：7487-88-9)4.1.9醋酸钠（CH COONa CAS号：6131-90-4).4.1.10氢氧化钠（NaOH.CAS号：1310-73-2）4.1.11十水四硼酸钠（NaB O;10HO CAS号：130396-4).
4.2溶液配制
4.2.1甲醇-二氯甲烷溶液（199，体积比）：量取10mL甲醇加人990mL二氯甲烷中，混匀.4.2.2乙晴-甲苯溶液（31，体积比）：量取100mL甲苯加人300mL乙晴中，混匀.4.2.3氢氧化钠溶液（0.05mol/L）：称取2.0g氢氧化钠用水溶解并定容至1000mL.混匀.
GB 23200.112-2018
4.2.5OPA试剂：称取50.0mg邻苯二甲醛，溶于5mL甲醇中，混匀；再称取1.0g2-二甲胺基乙硫醇盐酸盐，溶于5mL.十水四硼酸钠溶液（4.2.4），混匀；将上述2种溶液倒人490mL.十水四硼酸钠溶液（4.2.4），混匀.
4.3标准品
9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物标准品参见附录A，纯度≥95%.
4.4标准溶液配制
4.4.1标准储备溶液（100mg/L)：准确称取10mg（精确至0.1mg）各农药标准品.用甲醇溶解并分别定容到10mL.标准储备溶液避光一18C保存，有效期1年.4.4.2混合标准溶液：准确吸取一定量的单个农药储备溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度. 混合标准溶液，避光0℃～4C保存，有效期1个月.
4.5材料
4.5.1固相萃取柱1：氨基填料（NH）500mg，6ml.4.5.3乙二胺-N-丙基硅烷硅胶（PSA)：40μm~60μm4.5.5陶瓷均质子；2 cm（长）×1cm（外径）. 4.5.4八烷基甲硅烷改性硅胶（C）：40μm~60cm.4.5.6微孔滤膜（有机相）：0.22μm×25mm
5仪器设备
5.1液相色谱仅：配有柱后衍生反应装置和荧光检测器（FLD）.5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g.5.4高速离心机：转速不低于4200r/min. 5.3高速匀浆机：转速不低于15000r/min，5.5组织搞碎机.5.6旋转蒸发仪.5.7氮吹仪：可控温.5.8涡旋振荡器.
6试样的制备
6.1试样制备
蔬菜和水果的取样量按照相关标准的规定执行，食用菌样品随机取样1kg.样品取样部位按照GB2763的规定执行，对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理：对于细长、肩平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同 部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆，放人聚乙烯瓶中.
取谷类样品500g，粉碎后使其全部可通过425μm的标准网筛，放人聚乙烯瓶或袋中.取油料作物、茶叶、坚果和香辛料各500g，粉碎后充分混匀，放人聚乙烯瓶或袋中.
植物油类搅拌均匀，放人聚乙烯瓶中，
6.2试样储存
试样于-18℃条件下保存.
7分析步骤
7.1提取和净化
7.1.1蔬菜、水果和食用菌
称取20g试样（精确至0.01g）于150mL烧杯中，加人40mL乙晴，用高速匀浆机15000r/min匀浆提取2min，提取液过滤至装有5g~7g氯化钠的100mL具塞量简中，盖上塞子，剧烈振荡1min，在室温下静置30min.准确吸取10mL上清液，80℃水浴中氮吹蒸发近干，加人2mL甲醇溶解残余物，待净化，
即加人上述待净化溶液，用10mL离心管收集洗脱液，用2mL甲醇-二氯甲烷溶液（4.2.1）潮洗烧杯后 将固相萃取柱1（4.5.1）用4mL甲醇-二氯甲烷溶液（4.2.1）预淋洗，当液面到达柱筛板顶部时，立过柱，并重复一次，收集的洗脱液于50℃水浴中氮吹蒸发近干，准确加人2.50mL甲醇，涡旋混匀，用微孔滤膜（4.5.6）过滤，待测.
7.1.2谷物
称取10g试样（精确至0.01g）于250mL具塞锥形瓶中，加人20mL水，混匀后，静置30min，再加塞量筒中，盖上塞子，刷烈振荡1min，在室湿下静止30min.准确吸取10mL上清液，80C水浴中氮吹 人50mL乙晴，用振荡器200r/min振荡提取30min.提取液过滤至装有5g~7g氯化钠的100mL具蒸发近干，加人2mL甲醇溶解残余物，待净化.
将固相萃取柱1（4.5.1）用4mL甲醇-二氯甲烷溶液（4.2.1）预淋洗，当液面到达柱筛板顶部时，立即加人上述待净化溶液，用10mL离心管收集洗脱液，用2mL甲醇-二氯甲烷溶液（4.2.1）潮洗烧杯后 过柱，并重复一次，收集的洗脱液于50C水浴中氮吹蒸发近干，准确加人2.50mL甲醇，涡旋混匀，用微孔滤膜（4.5.6）过滤，待测.
7.1.3茶叶和香辛料
称取5g试样（精确至0.01g）于150mL烧杯中，加人20mL水，混匀后，静置30min，再加人50mL筒中，盖上塞子，刷烈振荡1min，在室温下静置30min.准确吸取10mL上清液，80℃水浴中氮吹蒸发 乙晴，用高速匀浆机15000r/min匀浆提取2min，提取液过滤至装有5g~7g氯化钠的100mL具塞量近干，加人2mL乙晴-甲苯溶液（4.2.2）溶解残余物，待净化.
将固相萃取柱2（4.5.2）用5mL乙睛-甲苯溶液（4.2.2）预淋洗，当液面到达柱筛板顶部时，立即加人上述待净化溶液，用100mL旋转蒸发瓶收集洗脱液，用2mL乙晴-甲苯溶液（4.2.2）涮洗烧杯后过柱，并重复一次，再用25mL乙晴-甲苯溶液（4.2.2）洗脱柱子，收集的洗脱液于40℃水浴中旋转蒸发近mL甲醇，涡旋混匀，用微孔滤膜（4.5.6）过滤，待测. 干，用5mL甲醇冲洗旋转蒸发瓶并转移到10mL离心管中，50℃水浴中氮吹蒸发近干，准确加人1.00
7.1.4油料和坚果
称取10g试样（精确至0.01g）于150mL烧杯中，加人20mL水，混匀后，静置30min，再加人具塞量简中，盖上塞子，剧烈振荡1min，在室温下静置30min.
准确吸取8mL上清液于内含1200mg无水硫酸镁、400mgPSA和400mgC的15mL塑料离心管中，涡旋混匀1min，然后4200r/min离心5min，吸取5mL上清液于10mL离心管中，在50°C水浴中氮吹蒸发近干，准确加人2.00mL甲醇，涡旋混匀，用微孔滤膜（4.5.6）过滤，待测.
7.1.5植物油
硫酸镁、1.5g醋酸钠及1颗陶瓷均质子，剧烈振荡1min，4200r/min离心5min. 称取3g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人5mL水、15mL乙晴，并加入6g无水
准确吸取8mL上清液于内含1 200mg无水硫酸镁、400 mg PSA和400 mg C的15 mL 塑料离心
GB 23200.112-2018
管中，涡旋混匀1min，然后4200r/min离心5min，吸取5mL上清液于10mL离心管中，在50C水浴中氮吹蒸发近干，准确加人1.00mL甲醇，涡旋混匀，用微孔滤膜（4.5.6）过滤，待测.
7.2测定
7.2.1仪器参考条件
a）色谱柱：C，柱，250mm×4.6mm（内径），5pm（粒径）;b）柱湿：42°℃；c）荧光检测器：a=330nm，入=465nm;d）流动相及梯度洗脱条件，见表1；
表1流动相及梯度洗脱条件（VV）
时间 流速 流动相（水）V 流动相（甲醇）V0 00 min mL/ min 1. 0 85 152 00 1. 0 75 256 50 1.0 75 2510 50 28 00 1. 0 1. 0 60 60 40 4033 00 1. 0 20 8035 00 1. 0 20 8035 10 37 00 1. 0 1. 0 0 100 10037. 10 1.0 85 15
e）柱后衍生：0.05mol/L氢氧化钠溶液，流速0.3mL/min;OPA试剂，流速0.3mL/min：水解温f）进样体积：10 gl 度，100℃；衍生温度，室温；
7.2.2标准工作曲线
精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用甲醇稀释成质量浓度为0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L和1.0mg/L的标准工作溶液，供液相色谱测定.以农药质量浓度为横坐标、色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线.
7.2.3定性及定量
7.2.3.1定性
以目标农药的保留时间定性.被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相差应在士0.05min之内.阳性试样需更换C柱进行定性确认.
7.2.3.2定量
外标法定量.
7.3试样溶液的测定
将混合标准工作溶液和试样溶液依次注人液相色谱仪中，保留时间定性，测得目标农药色谱峰面积，根据式（1），得到各农药组分含量.待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时，应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析.
7.4平行试验
按7.1~7.3的规定对同一试样进行平行试验测定.
7.5空白试验
除不加试料外，按7.1~7.4的规定进行平行操作.
