中华人民共和国国家标准
GB 4789.10-2016
食品安全国家标准
食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局 发布
前言
本标准代替GB4789.10-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》、SN/T0172-2010《进出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法》、SN/T2154-2008《进出口食品中凝固酶 阳性葡萄球菌检测方法兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术》.
本标准与GB4789.10-2010相比，主要变化如下：
试验用增菌液统一为7.5%氯化钠肉汤.
食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验
1范围
本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaareux）的检验方法.本标准第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验：第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数：第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品中金黄色葡萄球菌的计数.
2设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1恒温培养箱：36℃士1℃.2.3恒温水浴箱：36C~56℃. 2.2冰箱：2C~5℃.2.4天平：感量0.1g.2.6振荡器. 2.5均质器.2.7无菌吸管：1mL（具o.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头.2.8无菌锥形瓶：容量100mL、500mL.2.9无菌培养Ⅲ：直径90mm. 2.10涂布棒.2.11pH计或pH比色管或精密pH试纸.
3培养基和试剂
3.17.5%氯化钠肉汤：见A.1.3.2血琼脂平板：见A.2.3.3Baird-Parker琼脂平板：见A.3.3.5兔血浆：见A.5. 3.4脑心浸出液肉汤（BHI）：见A.4.3.6稀释液：磷酸盐缓冲液：见A.6.3.7营养琼脂小斜面：见A.7. 3.8革兰氏染色液：见A.8.3.9无菌生理盐水：见A.9.
第一法金黄色葡萄球菌定性检验
4检验程序
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图1.
图1金黄色葡萄球菌检验程序
5操作步骤
5.1样品的处理
称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~ 2min.若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡混匀.
5.2增菌
生长， 将上述样品匀液于36℃士1C培养18h~24h.金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊
5.3分离
将增菌后的培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36C士1C培养18h~24 h.Baird-Parker平板36C±1C培养24 h~48 h.
5.4初步鉴定
金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2mm~3mm，颜色呈灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明阉（沉淀），其外常有一清晰 带.当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感，有时可见到不分解脂肪的菌株，除没有不透明圈和清断带外，其他外观基本相同.从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其黑色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙，质地较干燥.在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白
色），菌落周围可见完全透明溶血圈，挑取上述可疑菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验.
5.5确证鉴定
5.5.1染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为us [ ~uv °0
5.5.2血浆凝固酶试验：挑取Baird-Parker平板或血平板上至少5个可疑菌落（小于5个全选），分别接种到5mLBH1和营养琼脂小斜面，36℃C士1°C培养18h~24h.
36C士1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现 取新鲜配制兔血浆0.5mL，放人小试管中，再加人BH1培养物0.2mL~0.3mL，振荡摇匀，置凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果.同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照.也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验.
结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI，36C士1℃培养18h~48h，重复试验.
5.6葡萄球菌肠毒索的检验（选做）
可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录B检测葡萄球菌肠毒素.
6结果与报告
6.1结果判定：符合5.4、5.5，可判定为金黄色葡萄球菌.6.2结果报告：在25g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌.
第二法金黄色葡萄球菌平板计数法
7检验程序
金黄色葡萄球菌平板计数法检验程序见图2.
图2金黄色葡萄球菌平板计数法检验程序
