中华人民共和国国家标准
GB 4789.29-2020
食品安全国家标准食品微生物学检验唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准与GB/T4789.29-2003相比，主要变化如下：标准名称修改为"食品安全国家标准食品微生物学检验唐莒蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验”：一修改了设备和材料： 修改了范围；修改了培养基和试剂：一修改了检验程序；增加了结果报告；增加了附录A.
食品安全国家标准 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌 食品微生物学检验 （椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验
1范围
本标准规定了食品中唐高蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）[Barkholderia gladioli（Pseudomonas cocovenenans subsp.farinofermentans）的检验方法.
本标准适用于食品中唐莒蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）的检验.
2设备和材料
2.2冰箱：2℃~8℃、-20℃~-30℃.2.3恒湿培养箱：26℃±1℃、36C±1℃2.4恒温水浴锅：46℃土1℃C. 2.5显微镜：10倍~100倍.2.6均质器.2.7离心机：3000r/min.2.9比浊计. 2.8电子天平：感量0.1g.2.10锥形瓶：容量100mL、500mL.2.11无菌培养Ⅲ：直径90mm、直径150mm.2.12无菌透明玻璃纸、滤纸.2.13无菌灌胃器：1mL. 2.14微生物生化鉴定系统.2.15小鼠：18g~20g，每一批次试验应使用同一品系的KM或ICR小鼠.
2.1实验室常规灭菌设备.
3培养基和试剂
3.1GVC增菌液：见A.1.3.2改良马铃薯葡萄糖琼脂（mPDA）：见A.2.3.3马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）：见A.2.1.3.4PCFA培养基：见A.3 3.5马铃薯葡萄糖半固体琼脂：见A.4.3.6卵黄琼脂：见A.5.3.7革兰氏染色液：见A.6.3.8氧化酶试剂：见A.7.
3.9Hugh-Leifson培养基（O/F试验用）：见A.83.11 缓冲葡萄糖蛋白陈水（MR和V-P试验用）：见A.10.3.12 西蒙氏柠檬酸盐培养基：见A.13.3.13 苯丙氨酸培养基：见A.14.3.14 糖发酵管：见A.15.3.15 3.16 抗O多价血清、型特异性因子血清（O-Ⅲ、O-IV、O-V、O-V、O-V、O-W）. 半固体琼脂：见A.16.
3.10蛋白陈水（截基质试验用）：见A.9.
3.17生化鉴定试剂盒.
4检验程序
唐莒蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验程序见图1.
图1唐营蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验程序
5操作步骤
5.1样品处理
无菌操作称取25g（mL）样品，置人盛有225mLGVC增菌液的无菌均质袋中（鲜银耳样品取1g，用剪刀剪碎，加入盛有20mLGVC增菌液的无菌均质袋中），用拍击式均质器拍打1min~2min：或置入盛有225mLGVC增菌液的无菌均质杯中，以8000r/min~10000r/min均质1min~2min;若样品为液态，振荡混匀.
5.2增菌
将上述样品增菌液置36℃±1℃培养20h~24h.
5.3分离
用直径3mm的接种环取增菌液一环，分别划线接种于mPDA平板和PCFA平板，36C士1C培养24h~48h.观察各个平板上生长的菌落，各个平板上菌落特征见表1.
表1唐葛蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）在不同分离平板上的菌落特征
菌落特征mPDA平板 培养24h后.菌落1mm~2mm，紫色，光滑、湿润、边缘整齐：培养48b后，部分PCFA 平板 菌落中心可有呈草帽状凸起培养24h后.菌落0.5mm~1mm，灰白色.光滑、湿润、边缘整齐卵黄琼脂平板 培养24h后.菌落2mm~3mm表面光滑、湿润：培养48h后，菌落周围形成乳 白色混渔环.斜射光下可见菌落及周围培养基表面呈虹彩现象
5.4初筛试验
自选择性琼脂平板上分别挑取5个以上典型或可疑菌落（低于5个全选），分区划线接种于卵黄琼脂平板，36℃士1C培养.挑取培养18h～24h的菌落进行革兰氏染色及氧化酶试验.对于革兰氏染色阴性、氧化酵试验阴性的菌继续培养至48h土2h，对于卵磷脂酶阳性，带有虹彩环的单个菌落，接种PDA平板，36℃±1C培养24h±2h.
5.5生化试验
从纯培养的PDA平板上挑取菌苔进行生化鉴定.唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）生化特征见表2.可选择生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统.
表2唐营蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）生化特征
生化试验 特征O/F试验（氧化型） 氧化葡萄糖
