中华人民共和国国家标准
GB 5009.204-2025
食品安全国家标准 食品中丙烯酰胺的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
一第一法中增加了“基质分散固相萃取法”试样净化方法； 修改了标准的适用范围：剩除了第一法“离子阱串联质谱仪”章节.
食品安全国家标准
食品中丙烯酰胺的测定
1范围
本标准规定了食品中丙烯酰胺的测定方法.本标准第一法液相色谱-质谱/质谱法适用于食品中丙烯酰胺的测定，本标准第二法气相色谱-质谱法适用于除咖啡、茶叶、食糖、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品外的食品中丙烯酰胺的测定.
第一法液相色谱-质谱/质谱法
2原理
色谱-质谱/质谱仅检测内标法定量. 试样中的丙烯酰胺用水提取，经过基质分散固相萃取法或固相萃取柱法或层析柱法净化后，以液相
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1甲酸（HCOOH）：色谱纯.3.1.2甲醇（CHOH）：色谱纯. 3.1.3乙晴（CHCN）：色谱纯.3.1.4正已烷（n-CH）.3.1.5乙酸乙酯（CHCOOCH）.3.1.6无水硫酸钠（NaSO）.3.1.8氯化钠（NaCl）. 3.1.7硫酸铵[（NH）SO].3.1.9干冰（CO）.
3.2试剂配制
3.2.1饱和硫酸铵溶液：称取80g硫酸铵晶体，加入水100mL，超声溶解，室温放置.临用现配.3.2.2甲酸-水溶液（0.1%）：准确移取1mL甲酸，用水稀释至1000mL.混合均匀.临用现配.
3.3标准品
3.3.1丙烯酰胺（CHNO，CAS号：79-06-1)标准品：纯度≥99%，或经国家认证授予标准物质证书的 标准品.
GB 5009.204-2025
3.4标准溶液配制
3.4.1丙烯酰胺标准溶液配制
3.4.1.1丙烯酰胺标准储备液（1000mg/L)：准确称取丙烯酰胺标准品10.0mg（精确至0.01mg），用甲醇溶解并定容至10mL，混匀，使丙烯酰胺质量浓度为1000mg/L.将溶液转移至棕色玻璃具塞密3.4.1.2丙烯酰胺中间液（100mg/L):移取丙烯酰胺标准储备液（1000 mg/L)1mL于10 mL容量瓶 闭容器中，置于一18C冰箱中避光保存.有效期为6个月.中，加甲醇稀释并定容至刻度线，混匀，使丙烯酰胺质量浓度为100mg/L.将溶液转移至棕色玻璃具塞密闭容器中，置于一18℃冰箱中避光保存，有效期为3个月.3.4.1.3丙烯酰胺工作液I（10mg/L)：移取丙烯酰胺中间液（100mg/L)1mL于10mL容量瓶中，用 水稀释并定容至刻度线，混匀，使丙烯酰胺质量浓度为10mg/L.临用现配.3.4.1.4丙烯酰胺工作液Ⅱl（1mg/L)：移取丙烯酰胺工作液I（10 mg/L)1mL于10mL容量瓶中，用
水稀释并定容至刻度线混匀，使丙烯酰胺质量浓度为1mg/L.临用现配.
3.4.2C-丙烯酰胺内标溶液配制
3.4.2.1"C-丙烯酰胺储备液（1000mg/L)：准确称取"C-丙烯酰胺标准品10.0mg（精确至0.01mg），用甲醇溶解并定容至10mL，混匀，使"C-丙烯酰胺质量浓度为1000mg/L.将溶液转移至棕色玻璃具塞密闭容器中，置于一18℃冰箱中避光保存.有效期为6个月.
3.4.2.2C-丙烯酰胺工作液（10mg/L)：移取“C-丙烯酰胺内标储备液（1000mg/L)1mL于100mL 容量瓶中，用水稀释并定容至刻度线，混匀使”C-丙烯酰胺内标质量浓度为10mg/L.临用现配.
3.4.3标准系列工作液
0.20 mL、0.50mL 1.00mL至10mL容量瓶中 加人"C -丙烯酰胺内标工作液（10mg/L)0.10mL 用 分别移取丙烯酰胺工作液Il（1mg/L)0.10mL、0.50mL、1.00mL和丙烯酰胺工作液I（10mg/L)水稀释至刻度线，混匀.标准系列溶液中丙烯酰胺的质量浓度分别为10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L和1000μg/L，C-丙烯酰胺内标浓度为100μg/L.可根据实际样品溶液的浓度适当调整标准系列工作液的浓度，临用现配.
3.5材料
3.5.1颗粒硅藻土：Extrelut20或相当产品.3.5.2基质分散净化管：含20mg石墨化炭黑、150mg十八烷基吸附剂、150mg乙二胺-N-丙基硅烷、200mg强阳离子交换材料和150mg硫酸镁，或等效产品. 3.5.3亲水亲油平衡固相萃取柱：填料为二乙烯苯和N-乙烯基毗略烷酮共聚物，柱容量为6mL，填料量为200mg，或等效产品.3.5.5玻璃层析柱：柱长30cm，柱内径1.8cm. 料量为200mg，或等效产品.3.5.6水系微孔滤膜：0.22pm和0.45pm
4仪器和设备
4.1液相色谱-质谱/质谱仪（LC-MS/MS)，配电喷雾离子源. 2
4.3旋转蒸发仪. 4.2组织粉碎机.4.4氮吹仪.4.5振荡器.4.7电子天平：感量为0.01mg和1mg. 4.6涡旋混合器.4.8离心机：转速10000r/min
5分析步骤
5.1试样制备
5.1.1焙烤食品、膨化食品、油炸谷物食品
保存. 取100g试样，加人100g干冰后，经组织粉碎机粉碎均匀，待干冰挥发完全后，于一18C冷冻
注：干冰温度极低，应使用厚柏手套或其他遮蔽物（如夹子）来取干冰；干冰升华时会释放出二氧化碳导致组织粉碎机内部压力上升.应注意其承压能力，防止腔体因压力过高爆破，并确保环境通风良好.
5.1.2咖啡、茶叶、食糖、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品
取100g试样，经组织粉碎机粉碎均匀（速溶咖啡和娄幼儿乳粉直接取样），于一18C冷冻保存.注：在粉碎过程中防止样品被过度加热面影响测定结果.
5.2试样提取
准确称取试样0.5g~2g（精确到0.001g），加人10mg/LC-丙烯酰胺内标工作溶液10pL（层析min离心10min，取上清液待净化.如无法通过离心获得上清液，如速溶咖啡、婴幼儿乳粉等基质样品，则取混悬液待净化.
5.3试样净化
5.3.1基质分散固相萃取法（适用于食品）
在试样提取的上清液中，加人5mL正己烷振荡萃取5min，于10000r/min离心5min，除去有机相，再用5mL正已烷重复萃取一次，在提取液加人10mL乙晴，振荡提取10min，加人0.5g氯化钠和4g无水硫酸钠作为盐析剂，振荡5min.以10000r/min离心5min，取2.00mL上清液于基质分散净化管中，涡旋5min，以10000r/min离心5min，取1mL上清液于氮吹仪中浓缩至近干，用0.20mL水复溶，经0.22um水系滤膜过滤，待测定.
5.3.2其他净化法（适用于除咖啡、茶叶、食糖、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品外的食品）
5.3.2.1固相萃取柱法
在试样提取的上清液中加人5mL正己烷，振荡萃取10min，于10000r/min离心5min，除去有机相，再用5mL正已烷重复萃取一次，取提取液6mL经0.45μm水系滤膜过滤，收集滤液待进行亲水亲油平衡固相萃取柱净化处理.亲水亲油平衡固相萃取柱使用前依次用3mL甲醇、3mL水活化，取上述滤液5.00mL，加在亲水亲油平衡固相萃取柱上，收集流出液，并用4mL80%的甲醇水溶液洗脱，收
