中华人民共和国粮食行业标准
粮油检验 粮食中赭曲霉毒素A测定 胶体金快速定量法
Inspection of grain and oils-Detection of ochratoxin A in grain-Rapid quantitativemethod ofcolloidalgold technique
国家粮食局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009及GB/T20001.4-2001给出的规则起草，
本标准由国家粮食局提出.
本标准由全国粮油标准化技术委员会（SAC/TC270）归口.
本标准负责起草单位：安徽省粮油产品质量监督检测站.
本标准参加起草单位：福建省粮油质量监测所、河南省粮油饲料产品质量监督检测中心、四川省粮油中心监测站、中国储备粮管理总公司、辽宁省粮油检验监测所、江苏省粮食局粮油质量监测所.
本标准主要起草人：季一顺、李皖光、黄建立、姬建生、李贵友、袁小平、朱旭东、莫晓松.
粮油检验粮食中赭曲霉毒素A测定 胶体金快速定量法
1范围
本标准规定了請曲霉毒素A的胶体金快速定量检测方法的原理、试剂及材料、仪器设备、样品制备、样品测定与结果表述.
专米、燕麦等粮食及其制品中曲霉市素A的快建定量检测.本标准适用于小麦
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的. 凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB5491根食、油料检验扦样、分样法GB/T-6682 分析实验室用水规格和武验方法GB/T27404-2008实验室旋量控制规池 食品理化检测
试样提取液中蔬曲得毒索A与检测条中胶体金微粒发生呈色反应，颜色深度与试样中曲霉毒素A的含量相关.用读数仪测定检测条上检测线和质控线的颜色深浅，根据颜色深涉和读数仪内置曲线自动计算出试样中精曲得毒索A含量.
4试剂
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符 GB/T6682中三级水的要求.
4.1稀释缓冲液：由胶体金检测条配套提供，或按照其说明书配制.
4.2提取液：70%（体积分数）甲醇溶液或胶体金检测条配套的提取液.
5仪器设备及材料
5.3离心机：转速不低于4000r/min， 5.2粉碎机：可使试样粉碎后全部通过20目筛.5.5孵育器：可进行45C恒温（控温精度土1C）孵育，具有时间调整功能.5.6读数仪；可测定并显示胶体金定量检测条的测定结果.5.7ROSA曲霉毒索A胶体金快速定量检测条”：需冷藏储存，具体储存条件参照使用说明：技术要
5.1天平：分度值0.01g.
5.4涡旋振荡器，
LS/T 6114-2015
求见附录A.
5.8滤纸：采用Whatman2V（或等效）滤纸.
6样品制备
6.1扦样与分样
按GB5491执行.
6.2样品处理
6.2.1取有代表性的样品500g，用粉碎机（5.2）粉碎至全部通过20目筛，混匀.
6.2.2准确称取10.00g试样于100mL具塞锥形瓶中，加人20.0mL试样提取液（4.2），密闭，用涡旋振荡器（5.4）振落1min~2min，静置后用滤纸（5.8）过滤，或取1.0mL~1.5mL混合液于离心管中，用离心机（4000r/min）（5.3）离心1min，取滤液或离心后上清液100μL于另一离心管中，加人1.0mL稀释缓冲液（4.1），充分混匀待测.
注：不同厂家的解曲霉毒素A胶体金快速定量条所用的样品制备方法不同，应按照产品使用说明中规定的方法进行操作.
7样品测定
7.1将胶体金检测条（5.7）从冷藏状态（2C～8C）取出放置至室温.将瓣育器（5.5）预热至45C.将检测条（5.7）平放在孵育器（5.5）凹槽中，打开加样孔.
7.2准确移取300uL待测溶液（6.2.2)，加人检测条加样孔中，关闭加样孔及孵育器（5.5）盖.
7.3瓣育10min后，取出检测条（5.7）观察C线（质控线）和T线（检测线）显色情况.若出现下述情 况，视为无效检测：
a）C线不出现：b）C线出现，但弥散或严重不均匀；c)C线出现，但T：或T线弥散或严重不均匀.
7.4选择读数仪（5.6）赭曲霉毒素A检测频道并设定基质为00（MATRIX00），开始样品测定，测定需在2min内完成，读数仪（5.6）自动显示样品中曲霉毒素A的含量.
若读数仪显示"30mb"，需移取300μL待测溶液于离心管中，加人1.0mL稀释缓冲液后混匀后，按照7.1~7.4进行测定，其中基质设定为01（MATRIX01）.
注：不同厂家孵育器和读数仪的使用方法可能有所不同，应按照产品使用说明的规定进行操作.
8结果表述
试样中储曲霉毒素A含量由读数仪自动计算并显示，单位为微克每千克（ug/kg）.
9重复性
相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于算术平均值20%的情况不超过5%. 在同一实验室，由同一操作者使用相同仪器，按相同的测定方法，并在短时间内对同一被测试对象
附录A
（规范性附录）
胶体金快速定量检测产品性能评价要求
体金快速定量检测类产品的技术性能进行验证，以确认其适用于本方法， 本附录参照GB/T27404一2008的要求，规定了胶体金定量检测试纸条的技术性能要求，用于对胶
A.1准确度
6次.计算检测条检测结果与实物标准样品的偏差，3个浓度水平的偏差均应控制在一20%～20% 采用5μg/kg、10μg/kg和20pg/kg3个浓度水平的实物标准样品，每个浓度水平测定不低于之间.
A.2精密度
采用5pg/kg浓度水平的实物标准样品，测定不低于6次，计算检测条批内变异系数，变异系数应≤20%.
A.3检测限
计算20份阴性样品测定均值加3倍标准差，其结果应小于或等于产品灵敏度标示值.
A.4批间稳定性
采用约5pg/kg浓度水平的实物标准样品，不得低于6个批次，每个批次测定不低于2次，批内测定取平均值，计算检测条批间变异系数，变异系数应≤25%.
A5质控
按照产品说明要求，检测检测条自带的阴性质控和阳性质控样品，阴性质控的检测结果小于1pg/kg，阳性质控样品的检测结果应在4μg/kg~10pg/kg范围内，表明本检测条质量合格.
