NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T3101-2017
肉制品中红曲色素的测定 高效液相色谱法
Determination of monascus pigments in meat products-HPLCmethod
中华人民共和国农业部发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由农业部农产品加工局提出.本标准起草单位：农业部肉及肉制品质量监督检验测试中心（江西省农业科学院农产品质量安全与 本标准由农业部农产品加工标准化技术委员会归口.标准研究所）江西省知识产权服务中心.本标准主要起草人：胡丽芳、董秋洪、周瑶敏、储怡士、李伟红、李瑞丽、魏爱花、尹德风.
肉制品中红曲色素的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了肉制品中红斑红曲胺、红曲玉红胺、红曲素、红斑红曲素和红曲玉红素含量的高效液相色谱测定方法.
本标准适用于熏煮火腿类、灌肠类、熏烤鸡鸭类、酱鸭类和腌腊类肉制品中红斑红曲胺、红曲玉红胺、红曲素、红斑红曲素和红曲玉红素含量的测定.
本标准方法检出限为0.18mg/kg，定量限为0.5mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中红曲色素用甲醇一乙酸乙酯（2十8.体积比）提取，提取液浓缩后，采用凝胶色谱净化，浓缩定容后，用高效液相色谱测定，外标法定量.
4试剂和材料
除非另有规定，以下试剂均为分析纯，水应符合GB/T6682规定的一级水要求.
4.1甲醇：色谱纯.4.2乙晴：色谱纯.4.3乙酸乙酯.4.4环已烷.4.6磷酸.4.7无水硫酸钠：于450C焙烧4h，冷却后于干燥器储存，备用.4.8标准品：红斑红曲胺（CAS号：514-66-9）、红曲玉红胺（CAS号：3627-51-8）、红曲素（CAS号：21516-68-7）、红斑红曲素（CAS号：514-67-0）和红曲玉红素（CAS号：13283-90-4）.纯度均大于等 于98%4.12乙酸乙酯一环已烷溶液：分别取500mL乙酸乙酯和500mL环已烷，混合均匀，备用.4.13标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取各标准品（4.8）10.0mg于10mL容量瓶中.用甲醇溶解并定容至刻度，置于棕色干燥器中，4C冰箱中避光保存.4.14标准中间液（0.1mg/mL)：准确吸取各标准储备液（4.13）1.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，置于棕色干燥器中，4C冰箱中避光保存.
4.5抗坏血酸.
4.9甲醇一乙酸乙酯溶液：分别取200mL.甲醇和800mL.乙酸乙酯，混合均匀，备用.
4.10乙睛一水溶液：分别取700mL乙睛和300mL水.混合均匀，备用，
4.11磷酸溶液：量取1000mL水.用磷酸（4.6）调pH2.5±0.3.
NY/T 3101-2017
4.15混合标准工作液：分别准确吸取各标准中间液（4.14）0.02mL、0.05mL.0.20mL、0.50mL、1.0mL.2.0mlL，用甲醇稀释并定容至10mL，配置浓度分别为0.20pg/mL、0.50μg/mL、20μg/mL、5.0pg/mlL.10.0gg/ml20.0μg/mL的混合标准系列工作液，置于棕色干燥器中，4C冰箱中避光保存，现配现用
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器.
5.4超声波清洗仪.
6试样制备与保存
取适量代表性试样，纹 碎并均质.用吉净密封装或试样瓶畜时后于 试样制备操作过程中应防止受到污染或使被测组分发生含量变化.
7分析步骤
7.1提取
称取制备好的试样：硫酸钠（4.7）2g，抗坏 15 ml [*un 00r/mm 1. 9）.加人无水 上清液转人另一个50mL 离心 溶液（4 CENT n 合并上清液，40℃下氮气吹至近 10ml
7.2净化
烷溶液（4.12）洗脱， 待净化液由5 流出 参透色 PC柱，设定泵流量！ 收集的流出液 P FT 发浓缩至约1mlL， 以乙酸乙酯-环己40C氮气吹至近干，用乙 水溶液（4. 10）定 至 ml供高效液相色 色谱测
7.1和7.2操作过程应在避光的环境下进行
a）色谱柱：Cg，250mmX46mm（内径），5gm，或相当者 b）流动相：乙睛和磷酸溶液（4.11），梯度洗脱，洗脱条件 表1；c）流速：1.0mL/min；d）柱温：30C；e）检测波长：400nm;）进样量：20L
表1液相色谱梯度洗脱条件
时间，min 乙睛，% 70 磷酿溶液，%0 5 70 30 30
表1（续）
时间，min %2 磷酸溶液.%20 90 1030 70 30
7.4标准曲线绘制
将混合标准系列工作液（4.15）依次按上述色谱条件上机测定，记录色谱峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线.
7.5测定
根据保留时间定性，外标法定量.超过标准曲线浓度范围的样液，应稀释后测定.5种红曲色素混合标准溶液液相色谱图参见附录A.
7.6空白试验
8结果计算
式中：
试样中红曲色 样液色询中 索各组分的含 单位为毫克每干克（mg kg);c A 标准 作中 红曲色素 单位为微克每毫升（μg/mL）V 样液 终定 本积，单位A 标准 作液计算结果应扣 试样质 色以重复性条件 2多点校正按式（ TERG
式中：
-标准曲线上查得的试样中红曲色素备组分的浓度，单位 立为微克每毫 升（μg/mL）.计算结果应扣除空白值.
以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留3位有效数字.
9精密度
在重复性条件下，获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.在再现性条件下，获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%.
