中华人民共和国农业行业标准
NY/T3300-2018
植物源性油料油脂中甘油三酯的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination of triacylglycerols in oilseeds andvegetable oils-Liquid chromatography tandem mass spectrometry
中华人民共和国农业农村部发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口.
本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、安徽燕庄油脂有限责任公司、农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室（武汉）、农业农村部油料及制品质量监督检验测试中心.
本标准主要起草人：王秀嫔、李培武、刘燕、徐彦辉、马飞、印南日、汪雪芳.
植物源性油料油脂中甘油三酯的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了植物源性油料油脂中甘油三酯的测定方法.
本标准适用于植物源性油料和植物油中三亚油酸甘油酯（LLL）、1-油酸-2.3-亚油酸甘油酯（OLL）、1-棕榈酸-2.3-亚油酸甘油酯（PLL）、1-棕榈酸-2-油酸 酯（OOO）、1.2-油酸-3-棕榈酸甘油酯（OOP）的测定 亚油酸甘油酯（POL）、三油酸甘油
2规范性引用文件
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GB5491粮食、油 杆样、分GB/T 5524 动植物油胎 实验室 扦样GB/T 6682 分 用水规格轴过
3方法原理
植物源性油料油 ，取上清液过有机相滤膜， H 色话一串联质谱仪选择反应监
4试剂与材料
4.10乙晴（CHN）：色谱纯，
4.11甲酸（HCOOH）：色谱纯.
4.12甲酸铵（HCOONH）：含量≥98.0%.
4.13正已烷-异丙醇-乙晴混合溶液（404020.V/V/V）：取40mL异丙醇（4.1）加40mL正已烷（4.2），用乙晴（4.10）定容到100mL，混匀.
4.14异丙醇-乙晴混合溶液（9010.V/V)：取900mL异丙醇（4.1），用乙晴（4.10）定容到1000mL， 混匀.
NY/T3300-2018
4.15乙晴-水混合溶液（6040.V/V)，取600ml乙晴（4.10），用水定容到1000mL，混匀.4.16异丙醇-乙晴混合溶液（9010，V/V）含10mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸（V/V）：称取630mg（精确到1.0mg）甲酸铵（4.12）加人到1L棕色容量瓶（5.8）中，再加人1mL甲酸（4.11），用异丙醇-乙晴混合溶液（4.14）定容到1L.4.17乙晴-水混合溶液（6040.V/V）含10mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸（V/V）：称取630mg（精确到1.0mg）甲酸铵（4.12）加人到1L棕色容量瓶（5.8）中，再加人1mL甲酸（4.11），用乙腊-水混合溶液 （4.15）定容到1L4.18单一标准储备溶液：分别称取100.0mg三亚油酸甘油酯（LLL）、1-油酸-2.3-亚油酸甘油酯（OLL）、1-棕榈酸-2，3-亚油酸甘油酯（PLL）、1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯（POL）、三油酸甘油10ml棕色容量瓶（5.8）定容至刻度，分别配制成浓度为10.0mg/mL的单一标准储备溶液，一20℃以 下避光保存.4.19混合甘油三酯标准储备液：分别量取6种单一标准储备溶液（4.18）1mL，于10mL棕色容量瓶（5.8）中，用异丙醇（4.1）稀释至刻度，配制成浓度为100.0μg/mL的混合标准工作溶液，一20℃以下避光保存.4.20混合甘油三酯标准工作溶液：分别吸取一定量的混合标准储备液（4.19），用异丙醇（4.1）稀释成 浓度分别为2.0μg/mL、5.0gg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL和40.0μg/mL的混合标准工作溶液.现用现配.
5仪器和设备
5.1液相色谱-申联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）.5.2分析天平：感量士1mg.感量士0.01mg. 5.3涡旋振荡器.5.4氮吹仪.5.5离心机：带有10mL转头，并能获得对应转速4500r/min的相对离心力.5.6微孔滤膜：0.22um，有机系.5.710mL尖底玻璃试管.5.810mL.100mL和1L的棕色容量瓶.5.95mL具塞离心管.5.10超声提取仪. 5.11粉碎机.
6试样制备
油料样品按照GB5491的规定进行扦样和分样后，取样品约200g，经粉碎机粉碎，过30目筛，置于密闭容器内.油脂样品按照GB/T5524的规定进行扦样和取样.
7分析步骤
7.1油料试样前处理
称取1g（精确至0.01g）油料试样至10mL尖底玻璃试管（5.7）中，加人5mL正已烷（4.2），超声提取20min（20℃条件下）.4500r/min离心3min，准确取出4mL提取液.N吹干，用100mL正已烷-异丙醇-乙晴混合液（4.13）复溶，涡旋1min后，取1mL复溶液用正已烷-异丙醇-乙晴混合液（4.13）定容 2
到100mL，定容液通过有机相滤膜（5.6）过滤，供LC-MS/MS分析.
7.2植物油试样前处理
量取0.01g（精确至0.0001g）植物油试样置于10mL的棕色容量瓶（5.8）中，将正已烷-异丙醇-乙晴混合液（4.13）作为提取溶液稀释植物油试样到10mL.用涡旋振荡器混匀，静置30min，取上清液通 过微孔滤膜（5.6）过滤.吸取100gL上清液，用异丙醇（4.1）稀释定容至10mL的棕色容量瓶中.供LC-MS/MS分析
7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
时间min 0310. 1 1015
7.3.2质谱参老条件
表26种甘油三酯定量离子和定性离子参考质谱条件
保留 母商厂 特征子离子 碰撞能量化合物 时间 min [MNH]* m/z m/z eV三亚油酸甘油酯（LLL） 8.50 896. 8 599.5337.3 271-棕酸-2.3-亚油酸甘油酯（PLL） 1-油酸-2.3-亚油酸甘油酯（OLL） 9.15 9.18 872.8 898.8 599.5339.3 599.5575.5 24 301-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯（POL） 9.79 874.8 601.5577.51.2-油酸-3-棕桐酸甘油酯（OOP） 三油酸甘油酯（000） 10.33 10.38 902.82 876.80 *577.5603.5 603.5339.3 26 31为定量离子.
