CCSB46 ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T 42957-2023
氨基酸产品和添加剂预混合饲料中 赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸含量的测定
Determination of lysine，methionine and threonine in mercial amino acidproducts and additivepremixturefeeds
（ISO17180:2013，Animal feeding stuffs-Determination oflysine，methionine and threonine in mercial amino acidproducts andpremixtures,MOD)
2023-08-06发布2024-03-01实施 国家市场监督管理总局发布 国家标准化管理委员会
GB/T42957-2023
前言
起草。
本文件修改采用ISO17180：2013《动物饲料氨基酸产品和预混合饲料中赖氨酸、蛋氨酸和苏氨 酸的测定》。
本文件与ISO17180：2013相比，在结构上有较多调整。
两个文件之间的结构编号变化对照一览 表见附录A。
本文件与ISO17180：2013的技术差异及其原因如下： a）更改了适用范围（见第1章，ISO17180：2013的第1章），以满足我国添加剂预混合饲料产品 中赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸的检测需要； b）更改了对试验用水的要求（见5.1，ISO17180：2013的3.1)，以符合我国国家标准对试验用水 的规定； c）增加了称量精度（见5.6、5.11、5.13、5.14、8.2.1、8.2.2、8.3.1、8.3.2），以增加可操作性； d）更改了溶解操作（见5.14、8.2.1、8.2.2、8.3.1、8.3.2，ISO17180：2013的3.11.2、5.3.1、5.3.2、 5.4.1、5.4.2），容量瓶不用于溶解，以增加规范性； e）增加了500mL的玻璃烧杯（见6.1），以增加可操作性； f）删除了500mL的容量瓶（见ISO17180：2013的4.2)，以增加可操作性； g）增加了分析天平的精度要求（见6.9），以增加可操作性； h）更改了试样制备方法（见第7章，ISO17180：2013的5.1），以增加可操作性； i）增加了赖氨酸硫酸盐及其发酵副产品的称样量范围（见8.2.1和8.3.1)，以满足我国饲料行业 赖氨酸硫酸盐及其发酵副产品的实际检测需要； j）删除了实验室间检验的内容（见ISO17180：2013的7.1)，以适应我国的技术条件； k）更改了精密度要求（见第10章，ISO17180：2013的7.2），以满足我国饲料行业实际检测 需要； 1）删除了再现性的内容（见ISO17180：2013的7.3)，以适应我国的技术条件； m）删除了检测报告（见ISO17180：2013的第8章），以适应我国的技术条件。
本文件做了下列编辑性改动： a）为与现有标准协调，将标准名称更改为《氨基酸产品和添加剂预混合饲料中赖氨酸、蛋氨酸和 苏氨酸含量的测定》； b）更改了第1章的注中简称的使用范围； c）增加了4种氨基酸标准品的CAS号； d）更改了盐酸浓度表述； e）删除了“仪器设备”一章的悬置段； 1）增加了赖氨酸盐酸盐转换成赖氨酸的公式编号； g）更改了附录A的内容；
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。
本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)提出并归口。
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GB/T42957-2023 本文件起草单位：中国农业大学、全国畜牧总站。
本文件主要起草人：贺平丽、谯仕彦、郑君杰、李竞前、尹刘益、张雅惠、王春林、何志伟、杨苑鹤、 宋军、李瑶、迟超逸。
GB/T42957-2023
氨基酸产品和添加剂预混合饲料中 赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸含量的测定
警示一本文件可能涉及一些危险材料的使用和设备操作。
本文件并非旨在解决其使用时相关的 安全风险。
使用本文件前需要建立相应的安全健康规程并根据当地监管条例确定其适用性。
1范围
本文件描述了氨基酸产品和添加剂预混合饲料中游高赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸含量的测定方法。
本文件适用于饲料添加剂氨基酸、氨基酸硫酸盐和氨基酸盐酸盐、混合型饲料添加剂及添加剂预混 合饲料中游离赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸含量的测定，不适用于饲料添加剂蛋氨酸羟基类似物、蛋氨酸羟 基类似物钙盐，也不适用于饲料添加剂赖氨酸硫酸盐及其发酵副产物中结合赖氨酸含量的测定。
本文件不适用于区分单个氨基酸的D型和L型。
本文件游离赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸的定量限为0.1%。
注：为了表述方便，以下将使用“氨基酸"代替“游离赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸”。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于 本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195动物饲料试样的制备
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样中的氨基酸经稀盐酸提取，柠檬酸钠缓冲溶液稀释，添加内标正亮氨酸，用氨基酸分析仪或高 效液相色谱仪（HPLC)，阳离子交换色谱柱分离，柠檬酸钠缓冲溶液进行洗脱，通过三酮柱后衍生紫 外分光光度检测器或邻苯二甲醛（OPA)柱后衍生荧光检测器对氨基酸进行测定。
5试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
5.1水：GB/T6682，一级。
5.2赖氨酸盐酸盐标准品（CAS号：657-27-2)：纯度不低于99%，使用前放人盛有五氧化二磷的真空干 燥器中干燥2d。
5.3苏氨酸标准品（CAS号：80-68-2）：纯度不低于99%，使用前放人盛有五氧化二磷的真空干燥器中 1
GB/T 42957-2023 干燥2d。
5.4蛋氨酸标准品（CAS号：63-68-3）：纯度不低于99%，使用前放入盛有五氧化二磷的真空干燥器中 干燥2d。
5.5正亮氨酸标准品（CAS号：327-57-1)：作为内标，纯度不低于99%，使用前放入盛有五氧化二磷的 真空干燥器中干燥2d。
5.6氢氧化钠溶液[c（NaOH）=7.5mol/L]：用于柠檬酸钠缓冲溶液pH的调节。
用水（5.1）小心溶解 300g（精确至1mg）氢氧化钠，并定容至1L。
5.7盐酸，y（HCl)=370g/kg。
5.8柠檬酸钠二水合物。
5.9硫二甘醇。
5.10苯酚：纯度不低于986%。
5.11柠檬酸钠缓冲溶液（pH=2.2）：将19.61g（精确至1mg）柠檬酸钠二水合物（5.8）、5mL硫二甘醇 （5.9）、1g（精确至0.1mg）苯酚（5.10)和16.5mL盐酸（5.7）用800mL水（5.1）溶解，用少量盐酸（5.7） 或氢氧化钠溶液（5.6）调节pH至2.2。
苯酚起保存缓冲溶液的作用。
柠檬酸钠缓冲溶液也能由柠檬酸和氯化钠制备。
5.12盐酸溶液[eHC1）=0.1mol/量取8.2nL盐酸（5.），加人约900mL水（5.稀释，混合均匀 后加水(5.1)定容至1L。
5.13正亮氨酸内标储备溶液cCNle）2.5mmol/L1：用0主mol1盐酸（512）溶解0.328g（精确至 5.14氨基酸标准储备溶液mmol：每种氨基酸分别制备标准储备溶液。
标准溶液应仅包含 被分析的氨基酸，即仅包含赖氨酸、苏氨酸或蛋氨酸。
市售混合标准溶液，例如包含18种氨基酸的溶 液，无法提供最佳结果。
用0.1molL盐酸（5.129）分别溶解0.456g精确至0.1mg赖氨酸岳盐标准品（5.2)、0.297g（精 确至0.1mg）苏氨酸标准品（53）租0373g精确至9mg蛋氨酸标准品（5）后转移至1L容量瓶定 容。
低于5C保存，有效期6个月。
5.15混合氨基酸标准工作溶液制备方法如下。
a）称重稀释法：分别称量2.5mL各氨基酸标准储备溶液（5.14)的质量（m）及2.5mL正亮氨酸 内标储备溶液（5.13）的质量（m），然后将各氨基酸标准储备溶液（5.14分别与正亮氨酸内标 储备溶液（513）转移至50mL容量瓶（6.2）中，用柠檬酸钠缓冲溶液（6.11）定容。
低于5°C保 存，有效期1周。
b）体积稀释法：用移液管（6.4）或稀释器（6.7)移取等体积的氨基酸标准储备溶液（5.14）和正亮氨 酸内标储备溶液（5.13），用柠檬酸钠缓冲溶液（5.11）稀释。
示例：移取50L正亮氨酸内标储备溶液（5.13）和50μL氨基酸标准储备溶液（5.14）.用柠檬酸钠缓冲溶液（5.11） 稀释至1000gL。
5.16阳离子交换柱的洗脱缓冲液：购买市售缓冲溶液或根据仪器说明配制。
通常使用3种～5种含有 柠檬酸钠或碳酸钠和少量添加剂和防腐剂的缓冲溶液。
5.17三酮或邻苯二甲醛（OPA）溶液：购买市售试剂或按照仪器说明书配制。
6仪器设备
6.1玻璃烧杯：500mL、1000mL。
6.2容量瓶：50mL、100mL、1000mL。
6.3量筒：100mL、1000mL。
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