T/CHNAW 中国民族卫生协会团体标准
T/CNHAW0020-2025
人体尿液中8种农药暴露生物标志物 的测定液相色谱一串联质谱法
Determination of eight pesticide exposure biomarkers in human urine-Liquidchromatography tandem mass spectrometry
（报批稿）
中国民族卫生协会 发布
目次
前言1范围.2规范性引用文件3原理.4试剂和材料5仪器设备，6样品采集、运输和保存，7分析步骤，8方法特性9质量保证与质量控制10注意事项附录A（资料性） 8种农药暴露生物标志物的基本信息附录B（资料性） 8种农药暴露生物标志物及其同位素内标的参考质谱参数附录C（资料性） 8种农药暴露生物标志物的提取离子流图
前言
起草. 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
本文件的附录A、附录B、附录C为资料性附录.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由中国民族卫生协会提出并归口.
本文件起草单位：中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、中国科学院生态环境研究中心、广州市疾病预防控制中心、武汉市疾病预防控制中心.
本文件主要起草人：张续、胡小键、朱英、王亚、黎娟、谭磊、万延建、杨艳伟、林潇、于、邓芬芳、孙言风、黄家玲.
本文件为首次发布.
人体尿液中8种农药暴露生物标志物 的测定液相色谱一串联质谱法
1范围
本文件规定了人体尿液中2种农药原型（2.4-二氯苯氧乙酸、2.4，5-三氯苯氧乙酸）和6种农药代谢物（硝基苯酚、3.5.6-三氯-2-吡啶酚、3-苯氧基苯甲酸、4-氟-3-苯氧基苯甲酸、顺式二氯乙烯基二甲 基环丙烷羧酸、反式二氯乙烯基二甲基环丙烷羧酸）的液相色谱一串联质谱测定方法.
本文件适用于尿液样品中8种农药暴露生物标志物（2.4-二氯苯氧乙酸、2.4.5-三氯苯氧乙酸、硝基苯酚、3，5.6-三氯-2-吡啶酚、3-苯氧基苯甲酸、4-氟-3-苯氧基苯甲酸、顺式二氯乙烯基二甲基环丙烷羧酸、反式二氯乙烯基二甲基环丙烷羧酸）的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T38735人类尿液样本采集与处理
3原理
尿液样品中的农药暴露生物标志物经B-葡萄糖醛酸酶水解，用亲水-亲脂共平衡聚合物固相萃取技术进行富集和净化，液相色谱一串联质谱负离子多反应监测模式测定，以目标物的保留时间和离子丰度比定性，同位素内标法定量.
4试剂和材料
4.1除非有特殊说明，试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水.4.2甲醇（CHsOH）.4.3乙晴（CHCN）. 4.4乙酸（CHCOOH）.4.7乙酸钠溶液（c-0.2mol/L）：称取乙酸钠1.64g于100mL容量瓶，加入320μL乙酸，用水定容.4.9乙酸溶液（1999，V/V）：量取1mL乙酸，加入999mL水，混匀. 4.8乙酸甲醇溶液（12574，V/V/V）：量取1mL乙酸，加入25mL甲醇，加入74mL水，混匀.4.11乙酸乙腊溶液（1999，V/V）：量取1mL乙酸，加入999mL乙腊，混匀. 4.12标准物质：硝基苯酚（PNP）、3.5.6-三氯-2-吡啶酚（TCPY）、3-苯氧基苯甲酸（3-PBA）、4-氟-3-苯氧基苯甲酸（4F-3PBA）、2.4-二氯苯氧乙酸（2.4-D）、2.4 5-三氯苯氧乙酸（2 4 5-T）、纯度为98%以上，标准物质基本信息见附录A.4. 13同位素内标：13C-PNP、13C-TCPY、13C2 4-D、L3C-2 4 5-T、13C-3-PBA、13C-4F-3PBA、C-DCis-DCCA、13C-DTrans-DCCA，纯度为98%以上.
4.5甲酸（HCOOH）.
4.6β-葡萄糖醛酸酶：来源于罗曼蜗牛（Helixpomaria)，活性≥85 000U/mL.
4.10乙晴溶液（19，V/V）：量取10mL乙腊，加入90mL水，混匀.
顺式二氯乙烯基二甲基环丙烷羧酸（Cis-DCCA）、反式二氯乙烯基二甲基环丙烷羧酸（Trans-DCCA），
4.14单一标准及同位素内标储备溶液：分别准确称取标准物质及同位素内标1mg（精确至0.01mg）于10mL容量瓶，用甲醇定容.8种农药暴露生物标志物标准及其同位素内标储备溶液质量浓度均为100mg/L，4C可保存1年.
4.15混合标准及同位素内标中间溶液：分别准确移取PNP、TCPY、2.4-D、2.4 5-T、3-PBA、4F-3PBA、Cis-DCCA、Trans-DCCA标准储备溶液适量，甲醇定容至10mL，配制成混合标准中间溶液，质量浓度为10.0mg/L，4C可保存1年.分别准确移取8种同位素内标储备溶液0.100mL，甲醇定容至10mL， 配制成混合同位素内标中间溶液，质量浓度为1.00mg/L，4C可保存1年.
4.16混合标准及同位素内标使用溶液：移取混合标准中间溶液1.00mL置于10mL容量瓶，用甲醇定容，配制成质量浓度为1.00mg/L的混合标准使用溶液.采用相同方法配制混合同位素内标使用溶液（质量浓度为100g/L）.混合标准使用溶液和混合同位素内标使用溶液应现配现用.
4.17固相萃取柱：亲水亲脂共平衡聚合物固相萃取柱（30mg，3mL）或性能相当者.4.18滤膜：0.22μm，聚丙烯材质.
5仪器设备
5.1液相色谱-三重四极杆质谱仪：配电喷雾离子源.5.2电子天平：感量为0.01mg和1mg.5.3恒温水浴锅：可控制37C土2C.5.4离心机：最大转速4500rmin. 5.5固相萃取装置：24孔，可连接亲水亲脂平衡性固相萃取柱.5.6涡旋混匀器.5.7氮吹仪.
6样品采集、运输和保存
6.1样品采集
按GB/T38735中规定的方法采集.样品最少采集2.5mL.采集的样品应装在硼硅酸盐玻璃或聚丙烯材质的采样管中，使用聚丙烯或聚四氟乙烯材质的盖子，不得使用橡胶塞.
样品采集过程中增加现场空白样品的采集.现场空白样品需采用不含有待测目标物的纯水，使用与实际样品相同的采样管，在采样现场进行同步操作.
6.2样品运输和保存
现场采集时，如无冷冻保存条件，可先将尿液样品在放置有冰袋或冰盒的保温箱中暂存，并在12h内-20C冷链运输至实验室，避光保存.空白样品随同尿液样品保存和运输.尿液样品在-20℃下可保 存2个月，在-70℃下可至少保存1年.
7分析步骤
7.1样品前处理
7.1.1样品准备
将冻存的尿液样品取出，在4C下解冻并自然放置至室温.
7.1.2样品制备
用涡旋混匀器混匀尿液样品，准确移取1.00mL于5mL聚丙烯离心管中，依次加入10uL混合同位素内标使用溶液（4.16）（相当于10.0ng），0.5mL乙酸钠溶液（4.7）和15gLβ-葡萄糖醛酸 酶（4.6），在涡旋混匀器上充分振荡，置于37C水浴酶解12h，取出冷却至室温.离心10min（4500rmin），取上清液进行固相萃取.
7.1.3固相萃取
