犬感染棘球绦虫粪便及其污染牧草样本 采集、处理及检测技术规范
Technical guidelines for the collection processing and detection offecal samples from dogs infected with Echinococcus spp.and contaminatedpasture grass
中国兽医协会 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由新疆医科大学第一附属医院提出.
本文件由中国兽医协会归口.
本文件起草单位：新疆医科大学第一附属医院，吉林大学，新疆禹孚生物技术有限公司，新疆医科大学，中农华威制药股份有限公司，新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中 心），新疆伊犁州动物疾病控制与诊断中心.
本文件主要起草人：张文宝、李军、刘明远、刘晓雷、张远利、齐文静、游锡火、丁静、颜明智、韩振翔、李文涛、张耀、吾力江卡马力、班万里、刘帅、王雪、吴川川、田梦潇、陈荣贵.
引言
两种棘球病（包虫病），包括细粒棘球病（CE）和多房棘球病（AE，“虫癌"），是典型的兽源性人兽共患病.分别是由寄生在犬等犬科动物小肠里的细粒韩球绦虫（Echinococcius gramulosus）和/或多房棘球缘虫（Echinococcusmultilocularis）排出的虫卵感染人，家畜和野生动物所致.棘球蝴病控制的关键点是切断病原循环和对病原在食物链中的感染情况的监测.通过粪便样本检测犬等犬科动物是否感染棘球绦虫及其污染牧草等样本是否有虫卵或虫体组织是评估犬等动物和环境对棘球（包虫）病传播风险因素的关键考量指标.本标准旨在规范样本采集和测定方法，为制定棘球（包虫）病精细化管理的控制策略和措施提供依据.
本标准以村为基本单位，采集犬等犬科动物粪便及其污染牧草等样本，通过ELISA和PCR技术进行病原鉴定，探明村庄与感染相关的环境风险因子和流行病学传播途径的关键环节，评估中间宿主（包括人和牛、羊）被感染的风险，确定棘球（包虫）病的流行级别，指导棘球（包虫）病的防控、环境消毒和放牧管理措施等.
本规范的制定参考了国际标准及国内相关技术方案，结合实验室实践经验，旨在为科研机构、疾病防控部门及兽医诊断实验室提供规范野外采样的采集流程，确保样本的代表性、完整性和可溯性，为后续分析提供可靠数据基础，推动棘球（包虫）病的科学防控.
犬感染棘球绦虫粪便及其污染牧草样本采集、处理与检测技术规范
1范围
本文件规定了以村庄为基本单位，采集棘球绦虫犬科动物粪便样本及其污染牧草等样本，采样材料与人员准备、样本采集方法、样本处理、检测方法的技术要求.
本文件适用于科研机构、疾病防控部门及兽医诊断实验室进行各类棘球缘虫样本的采集、处理及阳性样本的确认.
2规范性引用文件
仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T32948犬科动物感染细粒棘球缘虫粪抗原的抗体夹心酶联免疫吸附试验检测技术
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4缩略语
DNA：脱氧核糖核酸（DcoxyribonucleicAcid） 下列缩略语适用于本文件.ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）PCR：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（Tris Acetate-EDTA Buffer）
5样本的采集、保存及运输
5.1器材
5.1.1剪刀、镊子、一次性塑料镊子.5.1.2自制PE袋（340mm*120mm）、密封塑料袋（340mm*240mm）.5.1.350mL离心管.5.1.4医疗废物收集袋.
T/CVMA 339-2026
5.1.5相机.
5.1.6采样登记本、防水记号笔、签字笔.
5.1.7一次性PE手套、无粉乳胶手套或丁晴手套.
5.1.8医用一次性防护服、一次性医用幅子、医用外科口罩、一次性防护鞋套.
5.1.9护目镜（或一次性面屏）.
5.2试剂
5.2.2含次氯酸钠消毒剂（1000~2000mg/L）.
5.3生物安全要求
5.3.1总则
生物安全要求按照GB19489的相关规定进行.
5.3.2采样生物安全要求
样本采集人员进入采样现场前做好个人防护，应包括一次性医用帽子、医用外科口罩、医用一次性防护服、无粉乳胶手套或丁晴手套、护目镜（或一次性面屏）、一次性防护鞋套.在采样前及结束后，按规范要求完成个人防护用品的穿脱，同组人员应互相检查个人防护是否符合要求.
5.3.3实验室生物安全要求
实验操作需在符合生物安全标准的P2实验室进行，操作人员应经过专业培训并获得授权.实验过程中，操作人员需佩戴个人防护设备，如一次性手套、口罩、防护服等.实验废弃物应按照生物安全相关规定进行处理，避免污染环境和造成感染风险.
5.3.4野外采样现场意外暴露处理
人员暴露出现皮肤污染，清水冲洗15min，用75%乙醇棉球消毒并进行包扎，更换污染衣物.样本泄漏时，隔离现场，升级防护（穿防护服等），固体样本用一次性望料镊子收集，用含次氯酸钠消毒剂（1000～2000mg/L）消毒30min以上.废弃物密封包装，带回实验室处理并记录报告.
5.4采样基本要求、时间及地点
5.4.1采样基本要求
在棘球（包虫）病流行区，以村庄为基本单位，每乡随机选择不少于3个自然村采集犬粪便和环境样本（牧草、蔬菜及水果等）.
每村犬粪便样本和环境样本分别不少于10份，样本不足时可以采集邻村相应样本进行补充.
5.4.2采样时间
春季（4~5月）和秋季（9~10月）.
5.4.3采样地点
