GB/T 13084-2006
前言
本标准是GB/T13084-1991《何料中氰化物的测定方法》的修订版。
本标准与GB/T13084-1991的主要区别是： 将原标准名称的“方法”二字去掉，英文由“Method for determination of glycosidic hydrocyanic acid in feeds"改为*Determination of cyanide in feed”; 增加定性快速方法及定性检测限； 增加比色法及检测限，并规定比色法为仲裁法。
本标准自实施之日起，同时代替GB/T13084-1991. 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。
本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心（武汉）。
本标准主要起草人：屈利文、钱肪。
GB/T 13084-2006
饲料中氰化物的测定
1范围 本标准规定了饲料中氰化物的定性和定量测定方法。
本标准适用于饲料原料、配合饲料中氰化物的测定。
2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（negISO3696：1987） GB/T14699.1何料采样 3试样的制备 按GB/T14699.1进行采样，选取饲料样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，通过1mm孔 筛，混匀，装人密闭容器中，保存备用。
4定性法 4.1原理 氰化物遇酸产生氢氰酸，氢氰酸与苦味酸钠作用，生成红色异氰紫酸钠。
定性测定方法的最低检出量为0.15mg（取样10g时，最低检测限为15mg/kg）。
4.2试剂和材料 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中二级纯度的水。
4.2.1无水乙醇。
4.2.2酒石酸。
4.2.3碳酸钠溶液（100g/L） 4.2.4苦味酸试纸：取定性滤纸剪成长7cm、宽0.3cm~0.5cm的纸条，浸入饱和苦味酸-乙醇溶液 中，数分钟后取出，在空气中阴干，贮存备用。
4.3分析步骤 取200mL~300mL锥形瓶，配备一适宜的单孔软木塞或橡皮塞，孔内塞以内径0.4cm~0.5cm， 长5cm的玻璃管，管内悬一条苦味酸试纸，临用时，试纸条以碳酸钠溶液（100g/L）湿润。
迅速称取5g试样，置于100mL锥形瓶中，加20mL水及0.5g酒石酸，立即塞上悬有苦味酸并以 碳酸钠湿润的试纸条的本塞，置40C～50C水浴中，加热30min，观察试纸颜色变化。
如试纸不变色， 表示氰化物为负反应或未超过规定：如试纸变色，需再做定量试验。
5比色法（仲裁法） 5.1原理 以氰武形式存在于植物体内的氰化物经水浸泡水解后，在酸性溶液中进行水蒸气蒸馏，蒸出的氢氰 酸被碱液吸收。
在pH7.0溶液中，用氯胺T将氰化物转变为氯化氰，再与异烟酸-吡唑酮作用，生成蓝
GB/T 13084-2006 色染料，与标准系列比较定量。
比色测定方法的最终蒸馏收集液中氢氯酸检出限为0.01μg/mL。
5.2试剂和材料 5.2.1氢氧化钠溶液（20g/L）. 5.2.2乙酸锌溶液（100g/L). 5.2.3酒石酸 5.2.4氢氧化钠溶液（10g/L）。
5.2.5氢氧化钠溶液（1g/L）. 5.2.6酚酰-乙醇指示液（10g/L）. 5.2.7乙酸溶液：乙酸+水=1+24. 5.2.8磷酸盐缓冲溶液（pH7.0）：称取34.0g无水磷酸二氢钾和35.5g无水磷酸氢二钠，溶于水并稀 释至1000ml。
5.2.9氯胺T溶液：称取1g氯胺T（有效氯含量应在11%以上），溶于100mL水中，临用时现配。
5.2.10异烟酸-吡唑酮溶液：称取1.5g异烟酸溶于24mL氢氧化钠溶液（4.2.1）中，加水至100mL， 另称取0.25g吡唑酮，溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺中，合并上述两种溶液，混匀。
5.2.11试银灵（对二甲氨基亚苄基罗丹宁）溶液：称取0.02g试银灵，溶于100mL丙酮中。
5.2.12硝酸银标准滴定溶液：r（AgNO）=0.020mol/L，按GB/T601规定配制和标定。
5.2.13氰化钾标准贮备溶液：称取0.25g氰化钾，溶于水中，并稀释至1000mL，此溶液每毫升约相 当于0.1mg氰化物，其准确度可在使用前用下法标定。
取上述溶液10.0mL，置于锥形瓶中，加1mL氢氧化钠溶液（5.2.1），使溶液pH大于11,加 0.1mL试银灵溶液（5.2.11)，用硝酸银标准溶液（5.2.12）滴定至橙红色。
5.2.14氰化钾标准工作液：根据氰化钾标准溶液的浓度吸取适量，用氢氧化钠溶液（5.2.5）稀释成每 毫升相当于1pug氢氰酸， 警告：氰化钾属剧毒危险物，配制和使用该试剂时，请戴上保护眼镜和乳胶手套，实验时一旦皮肤或 眼睛接触了氰化钾，应及时用大量的水冲洗。
接触过氰化钾的容器和废液可用碱液调至pH>10，再加 入200g/L的硫酸亚铁溶液50mL，搅拌，充分反应后排放。
5.3仪器、设备 5.3.1250mL玻璃水蒸气蒸馏装置。
5.3.2分光光度计。
5.4分析步骤 称取10g~20g试样于250mL蒸馏瓶中，精确到0.001g，加水约200mL，塞严瓶口，在室温下放 置2h~4h，使其水解。
加20mL乙酸锌溶液（5.2.2），加1g~2g酒石酸（5.2.3），迅速连接好全部蒸 馏装置，将冷凝管下端插人盛有5mL氢氧化钠溶液（5.2.4）的100mL容量瓶的液面下，缓缓加热，通 水蒸气进行蒸馏，收集蒸馏液近100mL，取下容量瓶，加水至刻度（V），混匀，取10mL蒸馏液（V）置 于25mL比色管中。
吸取0mL、0.3mL、0.6mL、0.9 mL、1. 2mL、1.5mL氰化钾标准工作液（5.2.14）（相当于0μg、 0.3pg、0.6μg、0.9yg、1.2μg、1.5yg氢氰酸）.分别置于25mL比色管中，各加水至10mL。
于试样 溶液及标准溶液中各加1mL氢氧化钠溶液（5.2.4）和1滴酚酞指示液（5.2.6），用乙酸（5.2.7）调至红 色刚刚消失，加5mL磷酸盐缓冲溶液（5.2.8），加温至37C左右，再加人0.25mL氯胺T溶液 （5.2.9），加塞混合，放置5min，然后加人5mL异烟酸-毗唑酮溶液（5.2.10），加水至25mL，混匀，于 25C~40C放置40min，用2cm比色杯，以零管调节零点，于波长638nm处测吸光度。
5.5结果计算 试样中氰化物（以氢氰酸计）的含量X，以质量分数（mg/kg）表示，按式（1）进行计算。
GB/T 13084-2006 X=- A×1000 m×V/V×1 000 式中： A--测定试样溶液氢氰酸的质量，单位为微克（μg）[1mL浓度c（AgNO）=0.020mol/L硝酸 银标准溶液相当于1.08mg氢氰酸]； m--试样质量，单位为克（g）； V试样蒸馏液总体积，单位为毫升（mL）； V-测定用蒸馏液体积，单位为毫升（mL）。
5.6结果表示 每个试样取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果，结果表示到三位有效数。
5.7重复性 同一分析者，同一实验室，使用同一台仅器，对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果 之间的差值： 在氰化物含量小于或等于50mg/kg时，不得超过平均值的20%； 在氰化物含量大于50mg/kg时，不得超过平均值的10%。
6滴定法 6.1原理 以氰式形式存在于植物体内的氰化物经水浸泡水解后，进行水蒸气蒸馏，蒸出的氢氰酸被碱液吸 收。
在碱性条件下，以碘化钾为指示剂，用硝酸银标准溶液滴定定量。
6.2试剂和材料 6.2.1氢氧化钠溶液：0.5g/L。
6.2.2硝酸铅溶液：0.05g/L. 6.2.3氨水：浓氨水+水=400mL+600ml。
6.2.4碘化钾溶液：0.5g/L。
6.2.5铬酸钾溶液：0.5g/L. 6.2.6硝酸银标准贮备液：c（AgNO）=0.1mol/L,按GB/T601规定配制和标定。
6.2.7硝酸银标准滴定液：c（AgNO）=0.01mol/L，于临用前将0.1mol/L硝酸银标准贮备液 （6.2.6）用煮沸并冷却的水稀释10倍，必要时应重新标定。
6.3仪器、设备 6.3.1水蒸气蒸馏装置：蒸馏烧瓶2500mL~3000mL。
6.3.2微量滴定管：2mL. 6.3.3分析天平：感量0.0001g. 6.3.4凯氏烧瓶：500ml. 6.3.5容量瓶：250mL（棕色）. 6.3.6锥形瓶：250ml。
6.3.7吸量管：2mL、10 mL。
6.3.8移液管：100ml。
6.4测定步骤 称取10g~20g试样于凯氏烧瓶（6.3.4）中，精确到0.001g，加水约200mL，塞严瓶口，在室温下 放置2h~4h，使其水解。
将盛有水解试样的凯氏烧瓶（6.3.4）迅速连接于水蒸气蒸馏装置（6.3.1），使 冷凝管下端浸入盛有20ml氢氧化钠溶液（6.2.1）锥形瓶（6.3.6）的液面下，通水蒸气进行蒸馏，收集 蒸馏液150mL~160mL，取下锥形瓶（6.3.6），加人10mL硝酸铅溶液（6.2.2），混匀，静置15min，经...
