中华人民共和国国家标准
GB/T14926.51-2001
实验动物 免疫酶试验
Laboratory animalImmunoenzyme assay(IEA)
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前 言
本标准修订了GB/T14926.18-1994（实验动物淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》中的免疫酶试验方法，将其作为一个独立标准列出.
本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.
本标准起草单位：中国实验动物学会.
本标准主要起草人：贸争鸣.
中华人民共和国国家标准
GB/T 14926.51-2001
实验动物免疫酶试验
Laboratory animalImmunoenzyme assay( IEA)
1范围
本标准规定了免疫酶试验（IEA）所用试剂、器材和操作步骤等.
本标准适用于实验动物病毒抗体的检测.
2原理
含有病毒抗原的细胞固定于玻片上，遇相应抗体形成抗原抗体复合物，此抗原抗体复合物仍保持的反应判定结果. 其抗原活性，可与相应的第二抗体酶结合物结合，遇酶底物产生颜色反应.在普通显微镜下，根据颜色
3主要试剂与器材
3.1试剂
3.1.1抗原片
3.1.1.1抗原片的制备
将病毒接种敏感细胞（表1），待细胞出现病变或确知细胞内含有丰富的病毒抗原后，用胰酶消化分散细胞，PBS洗涤三次，最后用适量PBS悬浮细胞.将细胞悬液滴于玻片孔内.同时消化不感染病毒宜.室温干燥后，冷丙酮（4C）固定10min.用蒸馏水漂洗后充分干燥，置于一20C备用. 的同批同种细胞，滴加同一玻片另一孔内，作为正常细胞对照.孔内滴加的细胞以细胞铺开、不重叠为
3.1.1.2抗原片的鉴定
每批抗原片在使用前，用相应的阳性血清和阴性血清进行鉴定.鉴定方法可用IEA或免疫荧光试验.在阴性血清与正常细胞和病毒感染细胞反应无色：阳性血清与正常细胞反应无色，面与病毒感染细胞呈棕褐色，且阳性细胞数达30%～50%时，此批抗原片可以使用.
3.1.2酶结合物
抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、免、犬或猴IgG抗体辣根过氧化物酶结合物用于检查相应动物的血清抗体.葡萄球菌蛋白A（SPA）辣根过氧化物酶结合物可代答抗小鼠、豚鼠、兔、犬和IgG抗体辣根过氧化物酶结合物使用.
3.1.3阳性血清
用病毒抗原免疫清洁或SPF级小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通级免、犬、所获得的抗血清；或自然感染恢复后的犬、猴血清.
3.1.4阴性血清
清洁或SPF级小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清；或确认无相应病毒感染的兔、犬、猴血清.
3. 1. 5 PBS(0. 01 mol/L pH7. 4)
氯化钠 8 g氯化钾 0.2 g
