中华人民共和国国家标准
GB/T14926.52-2001
实验动物 免疫荧光试验
Laboratory animalImmunofluorescence assay(IFA)
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前 言
本标准修订了GB/T14926.18-1994（实验动物淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》中的免疫荧光试验方法，将其作为一个独立标准列出.
本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.
本标准起草单位：中国实验动物学会.
本标准主要起草人：贺争鸣.
中华人民共和国国家标准
GB/T 14926.52-2001
实验动物免疫荧光试验
1范围
本标准规定了免疫荧光试验（IFA）所用试剂、器材和操作步骤等.本标准适用于实验动物病毒抗体的检测.
2原理
含有病毒抗原的细胞（组织培养细胞或动物组织细胞）固定于玻片上，遇相应抗体形成抗原抗体复合物.此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性，可与相应的第二抗体荧光素结合物结合.荧光素在紫外 光或蓝紫光的照射下，可激发出可见的荧光.因此，在荧光显微镜下以荧光的有无和强弱判定结果.
3主要试剂与器材
3.1试剂
3.1.1抗原片的制备
将病毒接种于敏感细胞上（见表1），待细胞出现病变或确知细胞内含有丰富的病毒抗原后，用胰酶消化下细胞，PBS洗涤三次，用适量PBS悬浮细胞，将细胞悬液滴于玻片孔中.同时消化未感染病毒的同批细胞，滴加同一玻片另一孔内，作为正常细胞对照.孔内滴加的细胞以细胞铺开、不重叠为宜.室温干燥后，冷丙酮（4C）固定10min.PBS漂洗后，充分干燥，置于一20C备用，在一20C条件下可保 存一年.
3.1.2羊或兔抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬或猴IgG异硫氰酸荧光素结合物，使用时用含0.01%~0.02%伊文思蓝PBS稀释至适当浓度.
3.1.3阳性血清
染恢复后的犬、猴血清. 用病毒抗原免疫清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通级免、犬、猴所获得的抗血清：或自然感
3.1.4阴性血清
清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清：或确认无相应病毒感染的兔、犬、猴血清.
3. 1.5 PBS(0. 01 mol/L pH7. 4)
氯化钠 氯化钾 Sg 0.2 g磷酸二氢钾 0.2 g磷酸氢二钠（NaHPO12HO) 2.83 g蒸馏水 加至1 000 mL
3.1.650%甘油PBS
甘油 5 mLPBS(0 01 mol/L pH7. 4) 5 mL
