中华人民共和国国家标准
GB/T14926.55-2001
Laboratory animal-Immunohistochemistry(IH)
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前 言
本标准规定了免疫酶组织化学法所用试剂、器材和操作步骤等.本标准起草单位:中国实验动物学会, 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.本标准主要起草人:贸争鸣.
中华人民共和国国家标准
GB/T 14926.55-2001
实验动物免疫酶组织化学法
Laboratory animal-Immunohistochemistry(IH)
1范围
本标准规定了免疫酶组织化学法(IH)所用试剂、器材和操作步骤等.
本标准适用于实验动物病毒抗原的检测.
2原理
用已知的特异性抗体与标本中待测抗原反应,如待测抗原是特异性抗体的相应抗原则形成抗原抗体复合物.此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性,可与相应的第二抗体酶结合物结合,遇酶底物产生颜 色反应,在普通显微镜下,根据颜色的反应判定结果.
3主要试剂与器材
氯化钠 8.5 g磷酸二氢钠(NaHPO2HO) 磷酸二氢钠(NaHPO12HO) 0.20 g 3.12 g蒸馏水 加至 1 000 mL
3.1.4底物溶液
3 3-二胺基联苯胺盐酸盐(DAB) 40 mgPBS 丙酮 100 mL 5 mL3%过氧化氢 0. 1 mL
3.2器材
3.2.1石蜡切片机或冰冻切片机.3.2.3普通显微镜, 3.2.2载玻片及盖玻片.
4操作步骤
4.1冰冻切片风干后用丙酮固定10~15min,石蜡切片,常规脱蜡至PBS(切片应用白胶或铬矾明胶 做粘合剂,以防脱片).
用0.3%过氧化氢甲醇溶液或1%盐酸酒精37C作用30min.