中华人民共和国国家标准
GB/T18638-2021 代替GB/T18638-2002
流行性乙型脑炎诊断技术
Diagnostic techniques for Japanese encephalitis
国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
目次
前言引言1范围2规范性引用文件3缩略语.4临床诊断5实验室诊断样品采集及处理7病毒RT-PCR检测方法. 6病毒分离鉴定 38补体结合试验检测方法9血凝抑制试验检测方法 6.10间接ELISA抗体检测方法 1111间接免疫荧光试验（IFA）检测方法 1312病毒中和试验检测方法13综合判定 16附录A（规范性附录）病毒RT-PCR检测方法试验用试剂配制 1718附录C（规范性附录）补体结合试验检测方法的预备试验 20附录D（资料性附录）补体结合试验检测方法及血凝抑制试验检测方法结果判定示意图23附录E（规范性附录）间接ELISA抗体检测方法试验用试剂配制 附录F（规范性附录）间接免疫荧光试验（IFA）检测方法试验用试剂配制 24
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准代替GB/T18638-2002《流行性乙型脑炎诊断技术》，与GB/T18638-2002相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下：
增加了“规范性引用文件"（见第2章）； 增加了“缩略语"（见第3章）；增加了“病毒RT-PCR检测方法”（见第7章）；一增加了“间接免疫荧光试验（IFA）检测方法”（见第11章）： 一增加了“病毒中和试验检测方法”（见第12章）；一增加了病毒RT-PCR检测方法试验用试剂配制（见附录A）：--增加了补体结合试验检测方法及血凝抑制试验检测方法结果判定示意图（见附录D)；增加了间接ELISA抗体检测方法试验用试剂配制（见附录E）；增加了间接免疫荧光试验（IFA）检测方法试验用试剂配制（见附录F）.
本标准由中华人民共和国农业农村部提出.
本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归口.
本标准起草单位：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所、温州大学、华中农业大学、吉林大学.
本标准主要起草人：金宁一、肖朋朋、鲁会军、曹胜波、黄少梅、张英、田明尧、李霄、李昌.
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
GB/T 186382002.
引言
流行性乙型脑炎（Japaneseencephalitis）又称日本乙型脑炎，是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种蚊媒性人兽共思传染病.马呈现脑炎症状，猪表现流产、死胎和睾丸炎，其他家畜和家禽大多呈隐性感染.有明显的季节性，于夏、秋季多发.本病分布很广，主要存在亚洲地区，给人畜健康和国民经济造成 很大的危害和损失.
引起本病的病原体为流行性乙型脑炎病毒（Japaneseencephalitisvirus），该病毒属于黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属（Flavivirax），是一种单股RNA病毒，病毒粒子呈球形，有脂蛋白的囊膜，具药都有良好的灭活作用，对胰酶、乙醚、三氯甲烷等亦敏感. 有血凝活性，能凝集鸡、鸭、鹅及绵羊红细胞.该病毒对外界抵抗力不强，对化学药品较敏感，常用消毒
世界动物卫生组织（OIE）推荐采用病毒分离鉴定、免疫荧光试验、血凝抑制试验、补体结合试验、血清中和试验等方法进行诊断.我国对该病的研究报道较多，目前比较常用的诊断方法仍是本标准规定的临床诊断、病毒分离鉴定、血凝抑制试验、补体结合试验、RT-PCR试验、间接ELISA试验、间接免疫 荧光试验和病毒中和试验.进行病毒分离鉴定时，要求样品处理应在可保证生物安全的相应级别实验室内进行操作：处理样品使用过的容器、物品、实验材料均应经有效消毒处理后方可运离实验室.
本标准的修订参考了O1E《陆生动物诊断试验和疫苗标准手册2018版（ManualofDiagnosticTests andVaccines forTerrestrialAnimals 2018），并结合了我国相关技术研究新成果.本标准的实施，对提高流行性乙型脑炎的诊断和疫情预测水平，及时采取防制措施，保证人畜健康，将起到重要作用.
流行性乙型脑炎诊断技术
1范围
本标准规定了流行性乙型脑炎（Japaneseencephalitis，JE）的临床诊断和实验室诊断的技术要求. 本标准适用于猪、马、骤、驴、牛、羊、狗、鸭、鹅和鸟等动物的流行性乙型脑炎的诊断和检疫.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T18088出人境动物检疫采样
GB19489实验室生物安全通用要求
3缩略语
下列缩略语适用于本文件.
BBS硼酸盐缓冲液（borate buffered saline） CFT补体结合试验（plement fixation test）CPE细胞病变效应（cytopathiceffect）DEPC焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate)DNA脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid) dNTP脱氧核糖三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate）ELISA酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay)FITC异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate）HRP辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase)JEV流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus） PBS磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline)RNA核糖核酸（ribonucleic acid）RT-PCR反转录-聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerase chain reaction）TCID50半数组织培养感染剂量（median tissue culture infective dose)
4临床诊断
4.1易感动物
猪、马、骤、驴、牛、羊、狗、鸭、鹅和鸟等多种动物均可被感染，其中猪的感染最为常见.
4.2临床症状
4.2.1猪感染后出现发热，少数猪会出现神经症状.怀孕母猪可引起流产、产死胎，公猪出现率丸肿大.4.2.2马感染后体温升高（39℃C～41C），出现神经症状（沉郁或狂躁不安），姿势异常，走路摇晃或转圆，四肢呈游泳状态.
