中华人民共和国国家标准
GB/T 19371.2-2007代替GB/T 19371.2-2003
Determination of methionine hydroxy analogue in feedsHigh-performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准是GB/T19371.2-2003《饲料中液态蛋氨酸羟基类似物的测定高效液相色谱法》的修订版.
本标准与GB/T19371.2-2003的主要差异如下：
对标准名称的修改，由“饲料中液态蛋氨酸羟基类似物的测定”改为"饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定”
对测定范围的修改，在范围中增加了预混料中羟基蛋氨酸钙的测定.
一对结果计算的修改，增加了羟基蛋氨酸钙的计算公式.
将最低检出量规范为最低定量限.
本标准由中华人民共和国农业部提出.
本标准主要起草人：闫惠文、赵小阳、索德成、怀明燕.
饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了高效液相色谱法（HPLC）测定配合饲料和浓缩饲料中液态蛋氨酸羟基类似物及配合饲料、浓缩饲料和漆加剂预混合饲料中羟基蛋氨酸钙的方法.
本标准适用于配合饲料和浓缩饲料中液态蛋氨酸羟基类似物的测定，也适用于配合饲料、浓缩饲料和漆加剂预混合饲料中羟基蛋氨酸钙的测定.
本标准最低定量限为0.03%.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T19371.1-2003饲料添加剂液态蛋氨酸羟基类似物
3原理
用10%的乙晴水溶液提取样品中的蛋氨酸羟基类似物，用氢氧化钾将蛋氨酸羟基类似物水解为有活性的单体，磷酸调节水解液的pH值.反相高效液相色谱分离紫外检测器214nm处测定蛋氨酸羟基类似物含量.由蛋氨酸羟基类似物含量可以换算出羟基蛋氨酸钙的含量.
4试剂
4.1乙晴：色谱纯.4.2提取剂：10%乙睛水溶液.4.3氢氧化钾溶液：50%4.5HPLC流动相：5%乙晴水溶液，每升加人0.5mL三氟乙酸. 4.4磷酸溶液：11（体积比）.4.6蛋氨酸羟基类似物标准样品：除非购买标样，否则需按GB/T19371.1-2003准确测定含量.
5仪器设备
5.1振荡器：水平方向振荡，频率250r/min~300r/min.5.2超声水浴. 5.3HPLC系统，由下述部件组成.5.3.1紫外检测器，适合在210nm处测定.5.3.2分析柱：填有粒度为5pm键合硅胶的C柱或性能相当的其他分析柱.柱温为室湿.
GB/T 19371.2-2007
6采样
6.1采样步骤
按GB/T14699.1采集实验室样品.
6.2试样的制备
将实验室样品粉碎，全部通过0.45mm筛，充分混匀.贮于磨口瓶中备用.
7分析步额
7.1提取
称取适量制备好的试料2g~5g（精确至0.0001g），置于150mL具塞三角瓶中，准确加人一定量的提取液，一般50mL~100mL，混合后置于振荡器上剧烈振荡30min或置于超声水浴中提取30min，静置10min，离心或过滤，滤液备用.
7.2水解
准确移取滤液5mL于10mL具塞试管中，准确加入0.1mL氢氧化钾溶液（4.3），手摇至少10s，准确加入0.2mL磷酸溶液（4.4），手摇至少10s，水解液离心或过滤，滤液过0.45gm滤膜后备用.
7.3标准溶液的制备
准确称取0.1136g液态蛋氨酸羟基类似物（88.00%）标准样品，用提取剂（4.2）定容至100mL，蛋氨酸羟基类似物浓度为1.00mg/mL.
准确吸取2.5、5.0、10.0.20.0mL以上溶液至50mL容量瓶，用提取剂（4.2）定容至刻度后摇匀，此标准系列的浓度为0.05、0.10 0.200.40、1.00mg/mL.
用以上标准系列与试样提取液同时做水解，测定.
7.4HPLC测定
流速：1.0mL/min.检测波长：210nm.
7.4.1色谱条件
进样量：20μL~50μl.
7.4.2测定
够重现的色谱峰. 向HPLC分析仪连续注人蛋氨酸羟基类似物标准溶液，直至得到基线平稳、峰形对称且峰面积能
依次注人标准及试样水解液，积分得到峰面积，用标准系列进行单点或多点校准.
8结果计算
试样中蛋氨酸羟基类似物的含量X以质量分数（%）表示，按式（1）计算：
试样中羟基蛋氨酸钙的含量X：以质量分数（%）表示，按式（2）计算：
式中：
（由标准曲线查得的试样测定液中蛋氨酸羟基类似物的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）：
V加到试样中的提取液体积，单位为毫升（mL）；
m试样质量，单位为克（g）；
338.4羟基蛋氨酸钙的分子质量；
GB/T 19371.2-2007
300.4羟基蛋氨酸的分子质量.
平行测定结果用算术平均值表示，结果表示至小数点后两位.
9允许差
当含量小于0.5%时，两个平行试料测定值相差不大于0.05%；当含量大于或等于0.5%时，两个平行试料测定值的相对偏差不大于5%.
