中华人民共和国国家标准
GB/T20762-2006
畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、 替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、 吉它霉素、交沙霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
Method for the determination of linycin oleandomycin erythromycin，tilmicosin，tylosin，clindamycin，spiramycin，kitasamycinand josamycin residues in livestock andpoultry musclesLC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A和附录B为资料性附录.本标准由中华人民共和国泰皇岛出人境检验检疫局提出. 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口.本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、山东农业大学.本标准主要起草人：庞国芳、王飞、曹彦忠、贾光群、连玉品、张进杰、李学民、范春林、刘永明、石玉秋.
本标准系首次发布的国家标准.
畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、 替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、 吉它霉素、交沙霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉
素、螺旋霉素、吉它霉素和交沙霉素残留量的液相色谱-申联质谱测定方法.
素、螺族霉素、吉它霉素和交沙霉素残留量的测定. 本标准适用于牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、苔米考星、泰乐菌素、克林霉
本标准的方法检出限：林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它霉素和交沙霉素均为1.0μg/kg.
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 12004 ISO 5725-1;1994 IDT)
性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，neqISO3696：1987）
旋霉素、吉它霉素和交沙霉素）的残留用乙晴提取，提取液用正已烷去除脂肪后浓缩，再用磷酸盐溶液溶 畜禽肉中九种大环内酯类抗生素（林可霉素、竹桃霉素、红霉素、苔米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1甲醇：色谱纯.4.2乙晴：色谱纯.4.3正已烷：色谱纯.4.5磷酸氢二钠. 4.4甲酸铵.4.6氢氧化钠，4.7氯化钠.
GB/T 20762-2006
4.82%氯化钠溶液：称取10.0g氯化钠（4.7），溶解于500mL水中.4.9磷酸盐缓冲溶液：0.1mol/L.6.0g磷酸氢二钠（4.5）溶解于450mL水中，用氢氧化钠（4.6）饱和溶液调节pH=8，用水定容至500mL.使用前配制.4.10甲醇水溶液（23）：400mL甲醇（4.1）与600mL水混合.使用前配制. 4.11甲酸铵溶液：0.1mmol/L.0.63g甲酸铵（4.4）加水溶解至1000mL.4.12林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它霉素、交沙霉素和罗红霉素（roxithromycin）标准物质：纯度≥95%.4.13标准储备溶液：1.0mg/mL.准确称取每种标准物质（4.12）10.0mg分别放人10mL容量瓶4.14混合标准储备溶液：10.0pg/mL.分别吸取0.1mL各标准储备溶液（4.13）于10mL容量瓶 中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀.4C保存.中，用甲醇定容至刻度.4C保存，可使用一周.4.15混合标准工作溶液：1.Oμg/mL.吸取1.0mL混合标准储备溶液（4.14）于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度.用前配制.4.16内标储备溶液；1.0mg/mL.准确称取10.0mg罗红霉素（4.12）于10mL容量瓶中，用甲醇溶4.17中间浓度内标溶液：10.0μg/mL.吸取0.1mL内标储备溶液（4.16）于10mL容量瓶中，用甲 解定容至刻度，混匀.4C保存.醇定容至刻度.4C保存.4.18内标工作溶液：1.0μg/mL.吸取1.0mL中间浓度内标标准溶液（4.17）于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度.用前配制.4.19基质标准工作溶液：分别吸取1.0pL、2.0pL、5.0L、10.0pL、50.0pL混合标准工作溶液（4.15），加入10.0pL内标工作溶液（4.18），用样品空白提取液定容至1.0mL，配成1.0ng/mL、 2.0ng/mL、5.0ng/mL、10 0ng/mL50.0ng/mL浓度系列基质标准工作溶液.用前配制.4.20Oasis HLB固相萃取柱或相当者：500mg，6mL，或相当者.使用前，分别用10mL甲醇、10mL水、5mL氯化钠溶液和5mL.磷酸盐缓冲溶液（4.9）活化，保持柱体湿润.4.21滤膜：0.2 ym.
5仪器
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源.5.2天平：感量0.01g，0.0001g.5.3固相萃取装置.5.4氮气浓缩仪.5.5具塞聚丙烯离心管：50mL. 5.6离心机.
6试样制备与保存
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内.密变化.
6.2试样的保存
将试样于-18C保存.
7测定步骤
7.1提取
称取5g试样，精确至0.01g，置于50mL离心管（5.5）中，加入10.0μL内标工作溶液（4.18）和15.0mL乙晴（4.2），于振荡器上刷烈振荡10min.以4200r/min的转速离心5min，取上清液于另一离心管中，加人2.0g氯化钠（4.7）和10.0ml正已烷（4.3），于振荡器上刷烈振荡10min，以4200r/min的转速离心10min，小心吸取中间乙精层12.0mL于另一离心管中，用氮气浓缩仪于55C水浴中吹至近干，
7.2净化
用7ml磷酸盐缓冲溶液（4.9）分两次溶解残液（7.1)，使样液以小于1.0mL/min的流速通过OasisHLB固相萃取柱（4.20）.样液全部流出后，再用10mL水和5mL甲醇水溶液（4.10）洗柱，弃去全部流出液，固相萃取柱用真空泵抽干1h.再用10mL甲醇（4.1）洗脱于15mL锥形试管中，用氮气浓缩仪于55C水浴中吹至近干，准确加入1.0mL甲酸铵溶液（4.11）溶解残渣.用阴性样品，按上述 步骤制备空白样品提取液.过0.2μm滤膜（4.21）后，供液相色谱-串联质谱仪测定.
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
b）进样量：20guL； a）色谱柱：Intersil C，3 μm 150mm×2.1mm 或相当者：c）流速：0.5mL/mind） 柱温：20C：e) 流动相：A：0.1mmol/L甲酸铵溶液，B：乙晴.梯度洗脱条件见表1.
表1梯度洗脱条件
u/ 流速/(ml/min) 流动相A/（% 流动相B/(%)0 0 0 50 95 51.0 0 50 95 56 0 6 1 0 50 0 50 40 5 60 9510 0 0 50 5 5610 1 0 50 95 520. 0 0 50 95 5
7.3.2质谱条件
a) 离子源：电喷雾离子源：b） 扫描方式：正离子扫播：d) 检测方式：多反应监测： 电喷雾电压：5500V；e） 雾化气压力：0.069MPa；g）辅助气流速：0.414 MPa； 气帘气压力：0.69MPa；h）离子源温度：350C：i）碰撞室出口电压：2.0V；j）定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表2.
