中华人民共和国国家标准
GB/T21310-2007
动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量 检测方法高效液相色谱/串联质谱法
Determination of residues of thyreostats in foodstuffs of animal originHPLC-MS/MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B、附录C均为资料性附录.本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出. 本标准由国家认证认可监督管理委员会归口.本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局.本标准主要起草人：彭涛、于静、国伟、李晓娟、孙利、凌云、代汉慧、张鸿伟、储晓刚、唐英章.
动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量 检测方法高效液相色谱/串联质谱法
1范围
本标准规定了动物源性食品中硫脲蜜啶（2-thiouracil，TU）、甲蕴咪唑（methimazole，TAP）、甲基硫氧嘧啶（methyl thiouracil，MTU）、丙硫氧嘧啶（propyl thiouracil，PTU）、苯基硫氧嘧啶（phenyl thi-ouracil.PhTU）、2-硫基苯并咪唑（2-mercaptobenzimidazole，MB）残留量高效液相色谱/中联质谱测定方法.
本标准适用于动物源性食品肌肉（免肉、鸡肉、牛肉、猪肉）、内脏（免肝、鸡肝）、奶和蛋中硫脲嗜啶、甲硫味唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶、2-硫基苯并咪唑残留量的定性确证和定量测定.
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，neqISO3696:1987）
3方法提要
采用乙酸乙酯提取试样中残留的硫脉磁啶、甲蔬咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧穆啶、苯基硫氧密啶和2-硫基苯并咪唑，提取液经液液分配和HLB固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱/串联质谱定性检测.内标法定量.
4试剂和材料
除非另有说明，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1甲醇：高效液相色谱级.4.2甲酸：高效液相色谱级.4.3乙酸乙酯：高效液相色谱级. 4.4正已烷：高效液相色谱级.4.5乙睛：高效液相色谱级.4.6磷酸.4.7蔬基乙醇.4.8二水乙二胺四乙酸二钠. 4.9无水硫酸钠：650C灼烧4h，置于干燥器中备用.定容至1L4.11乙睛饱和的正已烷：量取正已烷80mL于100mL分液漏斗中，加入适量乙晴后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙請层. 4.120.1%甲酸水溶液：准确量取1mL甲酸（4.2），用水定容至1L4.130.0025mol/L磷酸：准确量取0.2mL磷酸，用水定容至1 L.
4.14溶解液：90mL0.1%甲酸水溶液（4.12）中加入10mL甲醇.4.15标准物质：硫脲磁啶、甲蔬咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶、2-硫基苯并咪唑，纯4.16内标物质：5，6-二甲基硫氧嘧啶（5，6-dimethyl-2-thiouracil，DMTU)，纯度≥99%. 度均≥99%.4.17标准储备溶液：准确称取适量标准品（精确至0.0001g），用甲醇溶解，配制成浓度为100μg/mL的标准储备溶液，一18C冷冻避光保存，有效期3个月.4.18混合中间标准溶液：准确移取标准储备液（4.17）各1mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻4.19混合标准工作溶液：根据需要用甲醇把混合中间标准溶液（4.18）稀释成适合浓度的混合标准工 度，配制成浓度为10μg/mL的混合中间标准溶液，4C冷藏避光保存，有效期1个月.作溶液，现用现配.4.21内标标准工作溶液：准确移取0.1mL内标标准储备液（4.20）于10mL容量瓶中.用甲醇定容至 度为100μg/mL的内标标准储备溶液，-18C冷冻避光保存，有效期3个月.刻度，配制成浓度为1ug/mL的内标标准工作溶液，4C冷藏避光保存，有效期1个月.4.22HLB固相萃取柱；200mg，6mL，或相当者.4.23微孔滤膜：0.20pm，有机相.4.25氧气：纯度≥99.999% 4.24氮气：纯度≥99.999%
5仪器和设备
5.1液相色谱/申联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）.5.3分析天平：感量0.0001g.0.01g. 5.2组织搞碎机.5.4均质器：10000r/min.5.5振荡器.5.6离心机：10000r/min. 5.7氮吹仪.5.8旋涡混合器.5.9超声波水浴.5.10减压浓缩仪.5.11梨形瓶：100ml. 5.12具塞塑料离心管：50mL.5.13刻度试管：10ml.5.14移液枪：5mL，1mL，200μL5.15分液漏斗：50ml.
6试样制备
6.1肌肉和内脏
从原始样品取出有代表性样品约500g，用组织捣辞机充分接碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记，将试样置于一18C冷冻避光保存.
6.2奶
从原始样品取出有代表性样品约500g，充分搅拌混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记.将试样置于4C冷藏避光保存.
GB/T 21310-2007
6.3蛋
从原始样品取出有代表性样品约500g，去壳后用组织接碎机搅拌充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记.将试样置于4C冷藏避光保存.
注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或残留物含量发生变化.
7样品处理
7.1提取
（4.21）、50μL蔬基乙醇（4.7）、30gL0.1moL/L的乙二胺四乙酸二钠溶液（4.10）和适量无水硫酸钠 称取约5g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，依次加人150pL内标标准工作液（4.9），吸去样品中的水分，再加人20mL乙酸乙酯，用均质器以10000r/min均质1min后，振荡提取20min，再以4000r/min离心5min，收集上清液于100mL梨形瓶中.残渣用20mL乙酸乙酯再提取漏斗中，用30mL乙晴饱和后的正已烷（4.11）分三次液液分配，去除油脂.收集乙层，在40C水浴中 一次，合并上清液，在40C水浴中减压浓缩至近干.残留物用10mL乙晴溶解，并转移至50mL分液减压浓缩至近干，残留物用10mL0.0025mol/L磷酸（4.13）溶解，超声波水浴助溶5min后，待净化.
7.2净化
HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水预淋洗后，转人10mL样品提取液（7.1）.先用5mL水进行淋洗，弃去；再用5mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液于10mL刻度试管中.整个固相萃取净化过 程控制流速不超过2mL/min.洗脱液在40C下用N.吹干.残留物用1mL溶解液（4.14）溶解，误动1min后，过0.2μm微孔滤膜.供仪器检测.
7.3混合基质标准溶渡的制备
别加人混合中间标准溶液（4.18）或混合标准工作溶液（4.19），再加人150uL内标标准工作液（4.21）， 称取5份约5g阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，按照标准曲线最终定容浓度分余下操作同7.1和7.2.
8测定
8.1液相色谱条件
a）色谱柱：Waters ACQUITYUPLCTBEH C50mm×2.1mm（内径），1.7μm，或相当者；b）柱温：30C；c）流速：0.2mL/min;d）进样量：5zL；e）流动相及洗脱条件见表1.
表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min 流动相A（甲醇） 流动相 B(4.12)0 10% 90%1 00 10% 90%4 00 90% 10%6 00 90% 10%7 00 10% 90%10 00 10% 90%
8.2串联质谱条件
参见附录A.
