中华人民共和国国家标准
GB/T 21311-2007
动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物 残留量检测方法 高效液相色谱/串联质谱法
Determination of residues ofnitrofuran metabolites in foodstuffs ofanimalorigin-HPLC-MS/MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B、附录C均为资料性附录.本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口. 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局.本标准主要起草人：彭涛、李晓娟、国伟、孙利、林黎明、于静、邱月明、储晓刚、唐英章.
动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物 残留量检测方法 高效液相色谱/串联质谱法
1范围
本标准规定了动物源性食品中硝基映响类药物代谢物3-氨基-2-恶唑酮（3-amino-2-oxalidinone，AOZ）、5-妈林甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮（5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxalidinone，AMOZ）、1氨基-乙内酰脲（1-amino-hydantoin，AHD）和氨基豚（semicarbazide，SEM）残留量的高效液相色谱/串联质谱测定方法.
本标准适用于肌肉、内脏、鱼、虾、蛋、奶、蜂蜜和肠衣中硝基映喘类药物代谢物3-氨基-2-恶唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮、1-氨基-乙内酰豚和氨基豚残留量的定性确证和定量测定.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，neqISO3696:1987）
3原理
样品经盐酸水解，邻硝基苯甲醛过夜衍生，调pH值7.4后，用乙酸乙酯提取，正已烷净化.分析物采用高效液相色谱/中联质谱定性检测，采用稳定同位素内标法进行定量测定.
4试剂和材料
除非另有说明，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1甲醇：高效液相色谱级.4.2乙晴：高效液相色谱级.4.3乙酸乙酯：高效液相色谱级. 4.4正已烷：高效液相色谱级.4.5浓盐酸.4.6氢氧化钠.4.7甲酸：高效液相色谱级.4.8邻硝基苯甲醛. 4.9三水磷酸钾.4.10乙酸铵.4.110.2mol/L盐酸溶液：准确量取17mL浓盐酸（4.5）.用水定容至1L.4.122.0mol/L氢氧化钠溶液：准确称取80g氢氧化钠（4.6），用水溶解并定容至1L.4.130.1mol/L邻硝基苯甲醛溶液：准确称取1.5g邻硝基苯甲醛（4.8），用甲醇溶解并定容至 100 mL.4.140.3mol/L磷酸钾溶液：准确称取79.893g三水磷酸钾（4.9），用水溶解并定容至1L.
4.15乙晴饱和的正已烷：量取正已烷80mL于100mL分液漏斗中，加入适量乙晴后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙躺层即得.4.160.1%甲酸水溶液（含0.0005mol/L乙酸铵）：准确量取1mL甲酸（4.7）和称取0.0386g乙酸 铵（4.10）于1L容量瓶中，用水定容至1L.4.17标准物质：3-氨基-2-恶唑酮、5-吗琳甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮、1-氨基-乙内酰豚、氨基脲，纯度≥99%.4.18内标物质：3-氨基-2-恶唑酮的内标物，D-AOZ：5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮的内标物，4.19标准储备液：分别准确称取适量标准品（精确至0.0001g），用乙睛溶解，配制成浓度为 D-AMOZ；1-氨基-乙内酰豚的内标物，C-AHD；氨基脲的内标物，CN-SEM，纯度≥99%100mg/L的标准储备溶液，一18C冷冻避光保存有效期3个月.4.20混合中间标准溶液：准确移取标准储备液（4.19）各1mL于100mL容量瓶中，用乙定容至刻4.21混合标准工作溶液：准确移取0.1mL混合中间标准溶液（4.20）于10mL容量瓶中，用乙晴定容 度，配制成浓度为1mg/L的混合中间标准溶液，4C冷藏避光保存，有效期1个月.至刻度，配制成浓度为0.01mg/L的混合标准工作溶液，4C冷藏避光保存，有效期1周.4.22内标储备液：准确称取适量内标物质（精确至0.0001g），用乙晴溶解，配制成浓度为100mg/L的标准储备溶液，一18C冷冻避光保存，有效期3个月.4.23中间内标标准溶液：准确移取1ml内标储备液（4.22）于100mL容量瓶中，用乙晴定容至刻度， 配制成浓度为1mg/L的中间内标标准溶液，4C冷藏避光保存，有效期1个月.4.24混合内标标准溶液：准确移取中间内标标准溶液（4.23）各0.1mL于10mL容量瓶中，用乙晴定容至刻度，配制成浓度为0.01mg/L的混合内标标准溶液，4C冷藏避光保存，有效期1周.4.25微孔滤膜：0.20pm，有机相.4.26氮气：纯度≥99.999% 4.27氧气：纯度≥99.999%.
5仪器和设备
5.2组织捣碎机. 5.1液相色谱/申联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）.5.3分析天平：感量0.0001g，0.01g.5.4均质器：10000r/min.5.5振荡器.5.6恒温箱. 5.7pH计：测量精度士0.02pH单位.5.8离心机：10 000 r/min.5.9氮吹仪.5.10旋涡混合器.5.11容量瓶：1L 100mL 10mL. 5.12具塞塑料离心管：50ml.5.13刻度试管：10mL.5.14移液枪：5mL、1mL.100xL
6试样制备与保存
6.1肌肉、内脏、鱼和虾
从原始样品取出有代表性样品约500g.用组织捣辞机充分搞碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容2
器作为试样，密封，并标明标记，将试样置于一18C冷冻避光保存.
6.2肠衣
装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记.将试样置于一18C冷冻避光保存. 从原始样品取出有代表性样品约100g.用剪刀剪成边长<5mm的方块，混匀后均分成两份，分别 6.3蛋 从原始样品取出有代表性样品约500g，去壳后用组织接碎机搅拌充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记.将试样置于4C冷藏避光保存. 6.4奶和蜂蜜 从原始样品取出有代表性样品约500g，用组织鹅碎机充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记.将试样置于4C冷藏避光保存. 注：在制样的操作过程中应防止样品污染或残留物含量发生变化. 7样品处理 7.1水解和衍生化 7.1.1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣 称取约2g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人10mL甲醇-水混合溶液（11.体积比），振荡10min后，以4 000r/min离心5min，弃去液体.残留物中加人10mL 0.2mol/L盐酸，用均 质器以10000r/min均质1min后，再依次加人混合内标标准溶液（4.24）100gl.邻硝基苯甲醛溶液（4.13）100uL，涡动混合30s后，再振荡30min，置37C恒温箱中过夜（16h）反应. 7.1.2蛋、奶和蜂蜜 称取约2g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人10mL~20mL0.2mol/1盐酸（以样品完全浸润为准），用均质器以10000r/min均质1min后，再依次加人混合内标标准溶液（4.24） 100pL，邻硝基苯甲醛溶液（4.13）100μL，误动混合30s后，再振荡30min，置37C恒温箱中过夜(16 h)反应. 7.2提取和净化 取出样品，冷却至室温，加人1mL~2mL0.3mol/L磷酸钾（1mL盐酸溶液加0.1mL磷酸钾溶液），用2.0mol/1氢氧化钠调pH7.4（士0.2）后，再加人10mL~20mL乙酸乙酯（乙酸乙酯加入体积 与盐酸溶液体积一致），振荡提取10min后，以10000r/min离心10min，收集乙酸乙酯层.残留物用10mL~20mL乙酸乙酯再提取一次，合并乙酸乙酯层.收集液在40C下用N，吹干，残渣用1mL0.1%甲酸水溶液（4.16）溶解，再用3mL乙晴饱和的正已烷（4.15）分两次液液分配，去除脂肪.下层水相过0.20um微孔滤膜后，取10pl供仪器测定. 7.3混合基质标准溶渡的制备 7.3.1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣 称取5份约2g的阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人10mL甲醇-水混合溶液（11.体积比），振荡10min后，以4000r/min离心5min，弃去液体.残留物中加入10mL0.2mol/L盐酸，用均质器以10000r/min均质1min后，按照最终定容浓度：1、5、10、50、100ng/mL， 分别加人混合中间标准溶液（4.20）或混合标准工作溶液（4.21），再加人混合内标标准溶液（4.24）100pL余下操作同7.1.1和7.2. 7.3.2蛋、奶和蜂蜜 称取5份约2g的阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人10mL~20mL0.2mol/L盐酸（以样品完全浸润为准），用均质器以10000r/min均质1min后，按照最终定容浓度： 1、5、10、50.100ng/mL，分别加入混合中间标准溶液（4.20）或混合标准工作溶液（4.21），再加入混合内标标准溶液（4.24）100gL，余下操作同7.1.2和7.2.
