中华人民共和国国家标准
GB/T21970-2008
水质 组胺等五种生物胺的测定 高效液相色谱法
Water quality-Determination ofputrescine，cadaverine，spermidine，spermine and histamine-High performance liquid chromatography method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B、附录C为资料性附录.
本标准由中华人民共和国科学技术部和中国分析测试协会共同提出.
本标准由全国仪器分析测试标准化技术委员会归口.
本标准负责起草单位：中国医学科学院药物研究所、中国计量科学研究院.
本标准参加起草单位：中国人民解放军军事医学科学院、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、中国科学院生态环境研究中心、北京理工大学、国家地质实验测试中心、岛津北京分析中心、北京市 理化分析测试中心、中国农业科学院、中国地质大学（北京）、中国测试技术研究院.
本标准主要起草人：杜冠华、目扬、李红梅、王球、董方霆.
水质组胺等五种生物胺的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了用苯甲酰氯衍生化-高效液相色谱-紫外检测法测定水中腐胺、户胺、亚精胺、精胺及组胺含量的方法.
本标准适用于水中2.0mg/L~40.0mg/L的腐胺、尸胺、亚精胺、精胺及组胺的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.2一2004测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，neqISO3696：1987）
GB/T12999水质采样样品的保存和管理技术规定
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准.
3. 1水样water sample
供实验室检验或测试的未经处理的水.
3. 2试样treated water经过衍生化和萃取处理后，供高效液相色谱仪测试用水样.
4原理
水样经苯甲酰氯衍生化后用乙醚萃取，萃取物经溶剂转换后用高效液相色谱-紫外检测器检测，外标法定量.
5试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水.
5.1苯甲酰氯（CH;OC1）5.2乙醚(C;HoO)5.3甲醇（CHO）：色谱纯5.5氯化钠（NaC1）.
5.4乙晴（CHN）:色谱纯.5.6氮气（N）:99. 99%.
5.7滤膜；0.45ym，水相.
5.8-次性过滤器：13mm~15mm，0.45m，有机相.
5.9氢氧化钠（NaOH）溶液：2.0mol/L.
称取4g氢氧化钠，用50mL水溶解完全后，混匀.
5.11腐胺标准备溶液：1.00mg/mL.
准确称取0.1827g盐酸腐胺（CHN：2HC1，纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水溶解完全后，稀释至刻度，混匀，于4C保存，有效期为3个月.
5.12户胺（C;HN）标准贮备溶液：1.00mg/ml.
释至刻度，混匀.于4℃保存，有效期为3个月. 准确称取0.1000g户胺（纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后，稀
5.13亚精胺（CHN）标准贮备溶液：1.00mg/mL
准确称取0.1000g亚精胺（纯度≥99%>准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后，稀释至刻度，混匀.于4℃保存，有效期为3个月.
5.14精胺（CHN）标准贮备溶液：1.00mg/mL.
准确称取0.1000g精胺（纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后，稀释至刻度，混匀.于4℃保存，有效期为3个月.
5.15组胺（CHN）标准贮备溶液：1.00mg/mL.
准确称取0.1000g组胺（纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后，稀
释至刻度，混匀.于4℃保存，有效期为3个月.
5.16标准工作溶液：使用时配制.
5.16.1分别移取10.0mL腐胺（5.11）、户胺（5.12）、亚精胺（5.13）、精胺（5.14）及组胺（5.15）标准离胺、尸胺，亚精胺、精胺及组胺各0.100mg. 备溶液，置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，获得标准混合溶液.此标准混合溶液1mL含
5.16.2按表1分别移取不同体积的标准混合溶液（5.16.1）置于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，
表1标准工作溶液配制
标准混合溶液体积/mL 1 00 2 00 5 00 10 00 20 00腐胶、尸胺、亚精胺、精胺、组胺浓度/（mg/L） 定容体积/mL 2 00 50 4 00 50 10 00 50 20 00 50 40 00 50
6仪器
6.1高效液相色谱仪，紫外检测器：带梯度洗脱装置.6.3液体混匀器（或称涡旋混匀器）. 6.4恒温水浴箱.6.5具塞刻度试管：10mL.
6.2色谱柱：Cs色谱柱，或性能相当者.
6.6分析天平：感量0.1mg.
7样品的制备和保存
7.1水样保存
水样密封，于4℃保存，保存期不超过7d
7.2试样保存
试样密封，于4C保存，保存期不超过7d
8测定步骤
警告：由于有机生物胺成分可能存在有一定的毒副作用及过敏反应，实施本标准操作时建议配戴口罩和橡胶手套.
8.1水样的衍生和萃取
间每隔5 min 涡旋30 s. 苯甲酰氯（5.1），在液体混匀器（6.3）上涡旋30s，置于37C水浴（6.4）中振荡，反应时间20min，反应期
8.1.2衍生反应完毕后，加人1g氧化钠（5.5）、2mL乙醚（5.2），振荡混匀，涡旋30s，静置.待溶液分层后，用滴管将乙醚层完全移取至10mL具塞刻度试管（6.5）中，用氮气（5.6）或吸耳球缓缓吹干乙醚，加1.00mL甲醇（5.3）溶解，再用一次性过滤器（5.8）过滤后，作为高效液相色谱分析用试样.
8.2不同浓度标准工作溶液的衍生和萃取
8.2.1移取2.00mL不同浓度的标准工作溶液分别置于5个10mL具塞刻度试管（6.5）中，加人1 mL氢氧化钠溶液（5.9）.20gL苯甲酰氯（5.1)，在液体混匀器（6.3）上涡旋30s充分混匀.
8.2.2萃取步骤同8.1.2.
8.3高效液相色谱测定
8.3.1色谱条件
a）色谱柱：Ci色谱柱，5μm，4.6mm×250mm，或性能相当者； b）柱温：室温；c）流动相：A（乙睛），B（0.02mol/L乙酸铵）.梯度洗脱条件见表2；d）检测波长：254nm；e）进样量：20p.
表2梯度洗脱条件
时间/min 流速/(mL/min) A乙脂)/% B(0. 02 mol/1L 乙酸铵)/%0 00 5 00 1.0 1 0 30 75 70 2510 00 1.0 75 2515 00 1 0 30 70
8.3.2液相色谱分析测定
8.3.2.1仪器的准备
开机，预热，使用流动相冲洗色谱柱，待基线稳定30min后开始进样.
8.3.2.2定性分析
利用保留时间定性法.根据腐胺、尸胺、亚精胺、精胺及组胺的标准色谱图（参见附录A）中各物质的保留时间，确定样品中物质.
8.3.2.3定量分析
校准方法为外标法.
8.3.2.3.1校准曲线制作
使用衍生化的标准工作溶液（8.2.2）分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，分别绘制腐胺、户胺、亚精胺、精胺及组胺的校准曲线.
