中华人民共和国国家标准
GB/T 22325-2008
小麦粉中过氧化苯甲酰的测定 高效液相色谱法
Determination of benzoyl peroxide inwheat flour-High performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准由全国粮油标准化技术委员会归口. 本标准由国家粮食局提出.本标准起草单位：国家农业标准化监测与研究中心（黑龙江）.本标准起草人：彭丽萍、李光字、耿叙武、王志强、姜举娟、刘庆、姜雯、陈丽华、王世瑕、曹福成、解新周、孔鲁裔.
小麦粉中过氧化苯甲酰的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了以高效液相色谱测定小麦粉中过氧化苯甲酰含量的原理、试剂和材料、仪器设备、分析步骤、计算方法和精密度.
本标准适用于小麦粉中过氧化苯甲酰含量的测定.
本标准最低检出限为0.5mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，1SO5725-2：1994，1DT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696:1987.MOD)
3原理
由甲醇提取的过氧化苯甲酰，用碘化钾作为还原剂将其还原为苯甲酸，高效液相色谱分离，在230 nm下检测.
4试剂和材料
本标准所用试剂除特别注明外，均为分析纯试剂，实验用水应符合GB/T6682规定的一级水要求.
4.1甲醇：色谱纯.4.2碘化钾溶液：50%水溶液（质量浓度）.4.3苯甲酸：纯度≥99.9%，国家标准物质.4.4乙酸铵缓冲溶液（0.02mol/L）：称取乙酸铵1.54g用水溶解并稀释至1L.混匀后用0.45μm的 滤膜过滤后使用.4.5苯甲酸标准贮备溶液（1mg/mL）：称取0.1g（精确至0.0001g）苯甲酸，用甲醇稀释至100mL.
5仪器设备
5.2天平：感量0.0001g. 5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器：色谱柱：C反相柱.5.3旋涡混合器.5.4溶剂过滤器.
6分析步骤
6.1样品制备
称取样品5g（准确至0.1mg）于50mL具塞比色管中，加10.0mL甲醇，在旋涡混合器上混匀
1 min，静置5min，加50%碘化钾水溶液5.0mL.在旋涡混合器上混匀1min，放置10min，加水至50.0mL，混匀，静置，吸取上层清液通过0.22pm滤膜，滤液置于样品瓶中备用.
6.2标准曲线的制备
准确移取苯甲酸标准贮备液0 mL0. 625mL、1. 25 mL、2.50mL5. 00 mL、10.00 mL、12. 50 ml、25.00mL分别置于8个25mL容量瓶中，分别加甲醇至25.0ml.配成浓度分别为0μg/mL25.0pg/ml、由u/000/800u/0/00/000/0系列溶液.
中，分别准确加人苯甲酸标准系列溶液10.00mL，其余操作同6.1中"在旋涡混合器上混匀1min"以下 分别称取8份5g（精确至0.1mg）不含苯甲酸和过氧化苯甲酰的小麦粉于8支50mL具塞比色管叙述.标准液的最终浓度分别为：0yg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0pg/mL、80.0μg/mL、100.0pg/mL、200.0μg/mL.依次取不同浓度的苯甲酸标准液10.0pL，注人液相色谱仪，以苯甲酸峰面积为纵坐标，以苯甲酸浓度为横坐标，绘制标准曲线.标准物质色谱图和含有标准物质的小麦粉样品色谱图参见附录A中图A.1、图A.2.
6.3测定
6.3.1色谱条件
色谱柱：4.6mm×250mm.C反相柱（5μm）（为了延长柱子寿命，建议加C保护柱）.检测波长：230nm，流动相：甲醇：水（含0.02mol/L乙酸铵）为10：90（体积分数）. 流速：1.0mL/min.进样量：10.0gl
6.3.2样品测定
取10.0L试液（6.1）注入液相色谱仪，根据苯甲酸的峰面积从工作曲线上查取对应的苯甲酸浓度，并计算样品中过氧化苯甲酰的含量.
7计算方法
按式（1）计算样品中过氧化苯甲酰含量：
式中：
D一一样品中过氧化苯甲酰的含量，单位为克每千克（g/kg）；V一试样提取液的体积，单位为毫升（mL）； （一由工作曲线上查出的试样测定液中相当于苯甲酸的浓度，单位为微克每毫升（pg/mL）；m样品质量，单位为克（g）；0.992--由苯甲酸换算成过氧化苯甲酰的换算系数：242.2/（2×122.1）.
结果保留两位有效数字.
8精密度
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.2的规定，通过14个实验室对2个添加水平的试样所做的试验中确定的.获得重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算.
8.1重复性
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过重复性限（r），本标准的重复性限按式（2）计算：
小麦粉中过氧化苯甲酰的含量在0.00mg/kg~0.20mg/kg范围：
式中：
M-两次测定值的平均值，单位为毫克每千克（mg/kg）.
如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定.
8.2再现性
在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过再现性限（R），本标准的再现性限按式（3）计算：
小麦粉中过氧化苯甲酰的含量在0.00mg/kg~0.20mg/kg范围：
式中：
M-一两次测定值的平均值，单位为毫克每千克（mg/kg）.
