中华人民共和国国家标准
GB/T22506-2008
粮油检验酶改性磷脂中1-和 2-溶血磷脂酰胆碱的测定 高效液相色谱法
Inspection of grain and oils-Determination of 1- and 2- acyllysophosphatidylcholine in enzymatically modified phospholipidsHigh performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准由国家粮食局提出. 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口.本标准起草单位：江南大学.本标准主要起草人：王兴国、金青哲、单良、刘元法、宋志华、潘秋琴.
粮油检验酶改性磷脂中1-和 2-溶血磷脂酰胆碱的测定 高效液相色谱法
1范围
choline;1- LPC）和 2-溶血磷脂酰胆碱（2-acly Iysophosphatidylcholine;2- LPC）的原理、试剂、仪器设 本标准规定了用高效液相色谱法测定酶改性磷脂中1-溶血磷脂酰胆碱（1-acly lysophosphatidyl-备、样品准备、操作步骤、结果表示及精密度和准确度.
本标准适用以大豆磷脂、蛋黄磷脂、菜籽磷脂为原料制备的溶血磷脂酰胆碱的测定.
本标准的检出限为0.1μg
2规范性引用文件
下列标准中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987，M0D)
3原理
酶改性磷脂产品中的1-和2-溶血磷脂酰胆碱与磷脂酰胆碱（PC）等其他成分用高效液相色谱分离，采用示差折光检测器检测，外标法定量.
4试剂
以下所用的试剂，除特殊注明外，均为分析纯试剂：水为符合GB/T6682规定的一级水.
4.195%乙醇.4.2草酸（HCO2HO）.4.4磷脂标准品”：磷脂酰胆碱（PC）.1-棕榈酰-溶血磷脂酰胆碱（1-LPC），2-棕榈酰-溶血磷脂酰胆碱 4.3草酸溶液（0.02moL/L)：准确称取1.261g草酸（4.2），加水溶解并稀释至500mL.(2-LPC).
5仪器设备
5.1高效液相色谱仪：配折光检测器.5.3纤维膜；0.45gm 5.2高速离心机：10000r/min.5.4超声波清洗仪：180W.5.5天平：分度值0.0001g.
1）标准品可使用 Sigma公司的产品，给出Sigma公司仅为方便用户使用本标准，并无其继商业行为，其他凡是能够达到要求的标准品，均可以选择使用.
6样品准备
心，取上清液用0.45m纤维膜（5.3）过滤，现配现用. 称取50mg~100mg酵改性磷脂样品（m），用95%乙醇溶解稀释至25mL，用高速离心机（5.2）离
7操作步骤
7.1色谱条件
色谱柱：氨基柱.250mm×4.6mm，粒径5pm，或分离效果相当的色谱柱.
流动相：95%乙醇（4.1）：草酸溶液（4.3）=92：8（体积比），通过0.45μm纤维膜（5.3），并经过超声波（5.4）脱气处理.
流速：1mL/min.
柱温：25C.
进样量：10μL.
7.2标准曲线
分别精确称取适量预先经五氧化二磷干燥两天的磷脂酰胆碱、1-溶血磷脂酰胆碱、2-溶血磷脂酰胆碱标准品（4.4）.用95%乙醇（4.1）溶解、稀释，配置一系列浓度的标准溶液，标准溶液中各磷脂组分的浓度在0.05mmoL/L~2.0mmoL/L范围内，现配现用.
用微量进样器准确注人10gL现配的各浓度标准溶液于高效液相色谱仪（5.1）中.记录峰面积，以峰面积对进样量绘制标准曲线.
标准品的色谱图参见附录A.
注：配制好的标准溶液应在12h内完成测定.
7.3色谱测定
用微量进样器准确注人10L现配的样品液（6）于高效液相色谱仪（5.1）中，按照（7.1）规定的色谱条件进行色谱分析，记录峰面积，样品液中待测组分浓度较高时应进行适当稀释，保证其响应值均在仪器检测的线性范围内.根据保留时间定性，外标法定量，得到样品中1-溶血磷脂酰胆碱和2-溶血磷脂酰胆碱的摩尔浓度（c）.
注：配割好的样品液应在12h内完成测定.
8结果表示
样品中1-或2-溶血磷脂酰胆碱的含量按式（1)计算：
式中：
P--样品中1-或2-溶血磷脂酰胆碱的含量，以质量分数计.%；
V样品最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m样品质量，单位为毫克（mg）.
9精密度和准确度
测定值的相对标准偏差小于5%，不同浓度水平条件下，方法的回收率为96.7%~103.5%.
