中华人民共和国国家标准
GB/T22956-2008
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮 残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of praziquantel residue in fugu eel and baked eelLC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.
本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局.
本标准主要起草人：林峰、李志勇、吴映璇、欧阳少伦、林海丹、邵琳智、庞国芳.
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮 残留量的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准适用于河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中吡喹酮残留量的测定. 本标准规定了河豚鱼、鱼和烤鳗中此喹酮残留量的液相色谱-申联质谱测定方法.本标准的方法检出限：河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中毗喹酮残留量的检出限为5μg/kg.
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
2004 1SO 5725-1;1994 IDT)
性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，1SO5725-2：1994，IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696:1987 MOD)
3原理
联质谱仪检测，外标峰面积法定量. 采用乙酸乙酯提取样品中的吡喹酮残留，提取液经碱性氧化铝小柱净化，样品溶液供液相色谱-中
4试剂和材料
除特别规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.2甲醇：色谱纯. 4.1乙晴：色谱纯.4.3乙酸乙酯.4.4冰乙酸.4.50.1%乙酸溶液：准确移取1.0mL冰乙酸（4.4）至1L容量瓶中，加水至刻度，摇匀备用.4.6碱性氧化铝柱或性能相当者：1g，6mL. 4.7标准品：毗喹酮（praziquantel.CAS：55268-74-1)，纯度≥98%.4.8100mg/L标准储备液：准确称取吡喹酮标准品10.0mg（准确至0.01mg），用甲醇溶解并定容至100mL.该标准储备液避光置于-18C冰箱中保存.4.9标准工作液：根据需要，吸取一定量的100mg/L吡喹酮标准储备液（4.8）用乙晴-水（23）溶液4.10基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的标准工作液（4.9），用空白样品提取液配制成 稀释成适当浓度的标准工作液，使用前配制.不同浓度的基质混合标准工作溶液，使用前配制.
4.11滤膜：0.2 yum
5仪器和设备
5.2离心机：转速大于或等于4000r/min. 5.1液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾（ESI）源.5.3组织捣碎机.5.4匀浆机：转速大于或等于8000r/min.5.5液体混合器.5.6超声波水浴. 5.7固相萃取装置.5.8旋转蒸发仪.5.9天平：感量分别为0 01mg和0.01g.
6样品制备与保存
取样品中有代表性的可食部分约500g，用组织捣碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于-18C冰箱内保存.
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.
7测定步骤
7.1提取
准确称取2g样品（准确至0.01g）至50mL离心管中.加入10mL乙酸乙酯，勾浆机上8000r/min均质30s，4000r/min离心5min，上清液转移至25mL比色管中：另取一50mL离心管加人10mL乙酸乙酯，洗涤匀浆刀头10s，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混合器上涡旋混合2min.4000r/min离心5min，上清液合并至25mL比色管，用乙酸乙酯定容至25.0mL，摇匀备 用.
7.2净化
准确移取2.50mL样品提取液至蒸发瓶中，在40C下旋转蒸发至干，用2mL甲醇溶解，液体混匀器上混旋2min.置超声波水浴中超声5min.该样液全部转移至碱性氧化铝净化柱（4.6）上，控制流速在1mL/min~2mL/min.用2mL甲醇淋洗净化柱，收集全部流出液并定量转移至浓缩瓶中.40C下 真空旋转蒸发至干，用1.00mL乙晴溶娜残渣，并置超声波水浴中超声振荡1min，加人1.00mL水，置超声波水浴中超声振荡1min，0.2um滤膜（4.11）过滤，供液相色谱-串联质谱测定.
7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
b）柱温：40C； a）色谱柱：IntersilC，5pm，150mm×2.1mm（内径）或相当者；c）流动相：乙睛-0.1%乙酸（46）；d）流速：0.30mL/min;e）进样量：10pl.
7.3.2质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源： b）扫描方式：正离子扫描；c）检测方式：多反应监测模式（MRM）：d）监测离子对、定量离子对见表1；
表1哦喹酮的监测离子对和定量离子对
监测离子对（/) 定量离子对（m/=）313/203
e）雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体：使用前应调节各气体流量参考质谱参数见表2. 以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度，
表2参考质谱参数
质谐参数 参数值雾化气/kPa 448. 2气审气/kPa 137 9辅助加热气/kPa 517 1碰撞气 中等轴助加热气温度/C 500喷雾电压/V 5 000去集额电压/V 70碰撞能/V 23(m/z 313/2031 40(m/≥ 313/83)
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1定性测定
被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在土2.5%之内：且样品谱图中被测组分监测离子的相对离子丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为 样品中存在对应的待测物.
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度K K>50 20<K<50 10<K<20 K≤10允许的最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.3.3.2定量测定 在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液（4.10）进样，以峰面积为纵坐标，基质混合标准应值均应在仪器测定的线性范围内.吡喹酮标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图参见附录A中的 工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线.用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响图A.1.吡喹酮的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B.1. 7.4平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定. 7.5空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行. 8结果计算 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中此喹酮残留量的测定结果按式（1）计算：
