中华人民共和国国家标准
GB/T22977-2008
Determination of phenylbutazone residues
in bovine milk and milk powder-LC-MS-MS method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局.本标准主要起草人：王飞、王海洋、曹彦忠、贾光群、张进杰、石玉秋、庞国芳.
牛奶和奶粉中保泰松残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了牛奶和奶粉中保泰松残留量的液相色谱-中联质谱测定方法.本标准适用于牛奶和奶粉中保泰松残留量的测定.本标准的方法检出限：牛奶5.0μg/kg.奶粉40.0μg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 12004 ISO 5725-1; 1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987，M0D)
3原理
牛奶和奶粉中保泰松的残留用氨水保持碱性条件，用乙醇、乙醚和石油醚去除脂肪，然后在酸性条件下用四氢映响-正已烷混合溶液提取保泰松残留，浓缩后定容，供液相色谱-串联质谱仪测定.外标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯.
4.2甲醇. 4.1水：GB/T6682，一级.4.3乙醇.4.4氨水：化学纯.4.5乙醚.4.6石油醚.4.7四氢呋响：色谱纯. 4.8正已烷：色谱纯4.9乙睛：色谱纯.4.10乙酸乙酯.4.11盐酸. 4.12甲酸铵.4.13二硫苏糖醇（dithiothreitol，CAS：3483-12-3)：CHO;S，纯度≥99%4.14N N-甲基甲酰胶（N.N-Dimethylformamide-CAS：68-12-2）：HCON（CH）含量 99. 5%
GB/T 22977-2008
4.15四氢味响-正已烷混合溶液：（14）.200mL四氢映响（4.7）与800mL正已烷（4.8）混合.4.163.0mol/L盐酸：吸取25.8mL的盐酸（4.11)于100mL容量瓶中，用水定容至100mL.0.2m的水性滤膜. 4.170.01mol/1甲酸铵溶液：0.63g甲酸铵（4.12）于1000mL容量瓶中，加水稀释至刻度，过4.18稳定剂：0.25mg/mL.称取0.125g二硫苏糖醇（4.13），用乙酸乙酯（4.10）溶解并定容至500 mL容量瓶中.4.19标准物质：保泰松（CAS：50-33-9），纯度≥95%4.20保泰松标准储备溶液：100.0μg/mL.准确称取10.0mg保泰松标准物质（4.19）于100mL容 量瓶中，用约80mL甲醇（4.2）溶解.加入5.0mL稳定剂（4.18），用甲醇（4.2）定容至刻度，混匀.4C保存，4.21中间浓度标准溶液：1.0yg/mL.吸取10.0gL保泰松标准储备溶液（4.20）于10mL容量瓶中，用流动相定容至刻度.4C保存.4.22基质标准工作溶液：分别吸取5.0gL、10.0uL、50.0gL.200.0pL中间浓度保泰松标准溶液 （4.21），加人20pLN，N-甲基甲酰胺（4.18），用基质空白溶液定容至1.0mL，配成5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、200.0ng/mL浓度系列标准工作溶液.在4C保存，可使用一周.4.23混膜；0. 2 yum.
5仪器
5.1液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源.5.2天平：感量0.01g-0 0001g5.3旋涡混合器.5.4氮气浓缩仪. 5.5具塞聚丙烯离心管：10mL.5.6离心机：可提供2600g离心力下（相当于4200r/min）.5.7超声波清洗仪.5.8振荡器.
6试样制备与保存
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内，密封后作为试样，标明标记.在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.
6.2试样的保存
将试样于-18C保存.
7测定步骤
7.1试样提取
7.1.1牛奶
称取1g试样.精确至0.01g，置于10mL离心管中，加人1.0mL乙醇（4.3），混匀；加入0.1mL氨水（4.4），混匀：加人2.5mL乙醚（4.5），于旋涡混合器混匀20s，静置5min；加入2.5mL石油醚（4.6），于旋涡混合器混匀20s，静置5min：小心吸弃上清液后，依次加人5mL四氢映响-正已烷混合溶液（4.15）和0.4mL3.0mol/1盐酸（4.16），于振荡器上剧烈振荡30min:在4200r/min离心力下离 心10min.小心吸取上清液于另一10mL离心管中，用氮气浓缩仪于50C水浴中吹至近干.
（）由00086（）由由N0
中助溶，残渣溶解后，过0.2um滤膜（4.23），供液相色谱-串联质谱仪测定.
按照1g奶粉加水8mL的比例，将奶粉溶解为还原奶后，按照7.1.1的提取步骤进行.
7.2空白样品提取液的制备
用阴性样品，按7.1操作步骤，制备用于配制系列基质标准工作溶液的空白样品提取液.
7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：a）色谱柱：Intersil Cts3μm，150mmX2.1mm（内径）或相当者：b）进样量：30gl;c) 流速：0.2mL/min;d) 柱温：40C；f) e) 流动相A：0.01mol/L甲酸铵溶液： 流动相B：乙睛；g）洗脱条件：恒配比A1B为63%：37%：流速：0.20mL/min：时间：10.0min.
7.3.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
b）扫描方式：正离子扫描； 离子源：电喷雾离子源：检测方式：多反应检测：d) 电喷雾电压；500V：e) 雾化气压力：0.069MPaf) g) 离子源温度：500C； 输助气流速：0.414L/min;h) 碰撞室出口电压：32V；i）定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压：见表1.
表1保泰松的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压
化合物中文名称 化合物英文名称 定性离子对（m/≥） 定量离子对（m/2） 气能量/V 去额电压/V保泰松 phenylbutazone 309/160 309/146 091/608 31 30 31 31
7.4液相色谱-串联质谱测定
7.4.1定性测定
被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与度接近的基质标准工作溶液中被测物的各定性离子相对丰度的比值K，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物.
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度的比值K K>50 20<K<50 10<K<20 K≤10允许的最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.4.2定量测定 在仪器最佳工作条件下，以基质标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲
