中华人民共和国国家标准
GB/T22983-2008
牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination of sixpolyether antibioticsresiduesin milk and milk powder-LC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准附录A、附录B为资料性附录.
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国青海出人境检验检疫局.
本标准主要起草人：薄海波、曹彦忠、丽丽、贾光群、星玉秀、李连通、庞国芳.
牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的液相色谱-中联质谱测定方法.
本标准适用于液态奶（包括原料奶、纯牛奶、脱脂牛奶）和奶粉（包括纯奶粉、脱脂奶粉和要幼儿配方奶粉）中拉沙洛菌素（lasalocid）、莫能菌素（monensin）、尼日利亚菌素（nigericin）、盐霉素（salinomycin）、 甲基盐霉素（narasin）、马杜霉素铵（madubamycin ammonium）残留量的测定.
本标准的方法检出限：牛奶中拉沙洛菌素、莫能菌素、尼日利亚菌素、盐霉素、甲基盐霉素、马杜霉素铵检出限均为0.2μg/L；奶粉中拉沙洛菌素、莫能菌素、尼日利亚菌素、盐霉素、甲基盐霉素、马杜霉素铵检出限均为1.6 μug/kg-
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 1-2004 ISO 5725-1:1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，1SO5725-2：1994，IDT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008 1SO3696:1987 MOD)
3原理
试样中聚醚类抗生素，用乙晴提取，固相萃取柱净化，高效液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯.
4.1水：GB/T6682，一级.4.2乙晴：色谱纯.4.3甲醇：色谱纯.4.4正已烷：色谱纯， 4.5乙晴饱和的正己烷：取少量乙睛（4.2）加人正已烷（4.4）中，充分混匀.静止分层后，取上层正已烷.4.6甲酸：优级纯.4.8无水硫酸钠：用前在650C灼烧4h，置于干燥器中冷却后备用. 4.9水系流动相：1mL甲酸与0.385g乙酸铵溶于1000mL水，混匀.当天配制.4.10甲醇溶液（11):100mL甲醇与100mL水混合均匀.
4.7乙酸铵：优级纯.
GB/T 22983-2008
4.11拉沙洛菌素（CAS 25999-20-6）、莫能菌素（CAS 22373-78-0)、尼日利亚菌素（CAS 28643-80-3)、盐霉素（CAS 55721-31-8)、甲基盐霉素（CAS55134-13-9）、马杜霉素铵（CAS 84878-61-5)标准品：纯度4.12标准储备溶液：准确称取适量的每种标准物质（4.11）.分别用甲醇（4.3）配制成浓度为1mg/mL 大于等于95%.标准储备溶液.储备液贮存在一18C冰柜中.4.13标准工作溶液：吸取1.00mL标准储备溶液（4.12），移人100mL棕色容量瓶，用甲醇定容，该溶4.14Oasis HLB固相萃取小柱或相当者：3mL 60mg.使用前依次用3mL甲醇和5mL水活化小 液浓度为10μg/mL，贮存在0C~4C冰箱中.柱，保持柱体湿润.4.15混膜；0. 2 yum.
5仪器和设备
5.1液相色谱-中联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI源）.5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g.5.3旋涡混匀器.5.4振荡器. 5.5离心机：最大转速不低于5000r/min，5.6移液器：1mL.5.7自动浓缩仪或相当者.5.8浓缩瓶：50mL. 5.9固相萃取装置.5.10氮气吹干仪.
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内.密封后作为试样，标明标记.在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.
6.2试样的保存
将试样于4C保存.
7测定方法
7.1提取
7.1.1牛奶样品
称取10.0g混匀的试样于50mL聚丙烯离心管中，加无水硫酸钠（4.8）约10g和乙（4.2）2×20mL，误旋混匀1min.振荡10min，以3000r/min离心3min.合并上清液，加10mL乙晴饱和的正已烷（4.5）.涡旋1min，弃去正己烷，减压浓缩至近干.用4mL甲醇溶液（4.10）溶解残渣，待净化，
7.1.2奶粉样品
称取12.5g奶粉于烧杯中，加适量35C~50C水将其溶解，待冷却至室温后，用水定容至100mL 充分混匀.量取10.0g样品溶液于50mL聚丙烯离心管中.按7.1.1步骤提取.
7.2净化
取柱.依次用5mL水和3mL甲醇溶液（4.10）淋洗柱体，4mL甲醇（4.3）洗脱.用氨气吹干仪将洗脱 将7.1所得的样品溶液加载到固相萃取柱中，并用2mL甲醇溶液（4.10）淋洗浓缩瓶，并入固相萃液吹干，用1.0mL甲醇溶解，过0.2μm滤膜，供液相色谱-申联质谱测定.
7.3基质标准工作溶液的制备
称取6份阴性样品各10.0g，置于50mL具塞的聚丙烯管中，分别加人不同体积的六种聚醚类抗生素的标准工作溶液（4.13），按6.1和6.2步骤操作.制备成浓度为1.0ng/mL、5.0ng/mL、 10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL 100 0 ng/mL 的基质标准工作溶液.
7.4测定条件
7.4.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：BEHCs，1.7xm，50mm×2.1mm（内径）或相当者：b）柱温：40C；c）进样量：5.0pL；d）流动相：流动相A：甲醇（4.3），流动相B：水系流动相（4.9）.洗脱程序及流速见表1.
表1流动相梯度程序及流速
时间/min 流速/(μL /min) A/% B/%0 00 2 00 250 250 90 0 70. 0 10 0 30 02 01 250 90 10 02 50 250 90 10 0
7.4.2串联质谱参考条件
中联质谱参考条件如下：
a）离子源：电喷雾离子源：b) c) 检测方式：多反应监测： 扫描方式：正离子扫描；d) 毛细管电压：2.8kV；e) 离子源温度：110C：f) 去溶剂气温度：380C； 去溶剂气（氮气）流量：600L/h；h) g) 锥孔气（氮气）流量：50L/h；碰撞气流量：0.1L/h；j）锥孔电压、碰撞能量和驻留时间等质谱参数及母离子和子离子详见表2.
表2六种聚醚类抗生素的质谱参数和保留时间
化合物名称 保留时间/ 母离子 子离子 （定量） 子离子 （定性） 碰能量/ 驻留时间/ 锥孔电压/min (n/2) （m/≥) （m/2） v ms V377 1 28拉沙洛菌素 1 48 613 5 377 1 595 3 38 50 72675 6 51莫能菌素 1 23 693 5 675 6 479 3 40 50 65尼日利亚 1.76 742 7 657 6 657.6 30 50 42菌素 461 4 25
