中华人民共和国国家标准
GB/T22996-2008
Determination of ginsenosides in ginsengLC-UVmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局，中华人民共和国辽宁出人境检验检 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口.疫局.本标准主要起草人：宋文斌、李军、董振霖、孙玉岭、隋凯、李佳昌、于一、代英成、李妹、庞国芳.
人参中多种人参皂贰含量的测定 液相色谱-紫外检测法
1范围
本标准规定了人参中人参皂贰（ginsenosides）Re、Rg：、Rf、Rb、Rc.Rb：含量的液相色谱-紫外检测方法，
本标准适用于生晒人参中人参皂贰Re、RgRf.Rb、Rc、Rb：含量的测定，
本标准的方法检出限：人参皂贰Re，Rg：RbRc、Rb：均为50mg/kg，人参皂贰Rf为25mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准.然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
2004 1SO 5725-1;1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，1SO5725-2：1994，IDT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987.MOD）
3原理
采用快速溶剂萃取法（ASE）在高温、高压的条件下，使人参皂贰完全彻底地被萃取到甲醇中，经浓缩、定容，液相色谱测定，外标法定量.
4试剂和材料
水为GB/T6682规定的一级水.
4.5.1六种人参皂贰Re、Rg、Rf、Rb、Rc、Rb：标准储备液：1.0mg/mL.用分析天平准确称取适量保存. 上述物质（4.4）.分别用甲醇（4.1)配制成1.0mg/mL的标准储备液.储备液避光在2C~4C下
种人参皂贰标准储备液（4.5.1)，用甲醇配制成混合标准工作液，避光在2C~4C下保存.
注：称取标准物质的质量是按照纯度修正过的质量.
5仪器
5.1液相色谱仪：配有紫外检测器.
GB/T 22996-2008
5.2加速溶剂萃取仪：型号ASE200，配有11mL萃取池.5.3电子天平：感量为0.01g和0.0001g.5.4旋转蒸发仪.5.5鸡心瓶：150mL. 5.6容量瓶：10mL.000~00000~05.8样品过涉器：PTFE 0.45μm
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
将人参样品混合均匀.分出0.5kg作为试样，用粉碎机粉碎并通过孔径20目筛.混匀密封，并做标记.
6.2试样保存
将试样置于4C条件下贮存.
7分析步骤
7.1提取
分别称取人参试样1g（精确到0.01g）和海砂13.0g，将试样与海砂充分混匀，装人事先放人纤维素滤膜的加速溶剂萃取仪的11mL萃取池中，拧紧池盖，进行萃取.
加速溶剂萃取条件如下：
a）萃取溶剂：甲醇；b）压力：10.7MPa; c）温度：140C；d）静态萃取时间：5min；e）静态循环次数：2次：f）冲洗体积：50%；g）吹扫时间：100s.
用甲醇定容，混匀.取部分样液用0.45μmm滤膜过滤到进样瓶中，待液相色谱测定. 将收集到瓶中的提取液转移到鸡心瓶中.50C下真空浓缩至小于10mL，转移到10mL容量瓶中，
7.2色谱测定
7.2.1液相色谱测定条件
液相色谱测定条件如下：
a）色谱柱：Acclaim 120C5μm，250mm×4.6mm（内径）或相当者；c）检测波长：203nm: b）流速：1mL/min;d）柱温：50C；e）进样量：10pL;{）流动相及梯度见表1.
表1流动相及梯度
步骤 运行时间/min 流动相水/% 流动相乙晴/%0 0 00 70 301 5.50 64 362 12 00 20 803 20 00 0 1004 25 00 70 70 305 30 00 30
7.2.2液相色谱测定
用不同浓度的人参皂式混合标准液分别进样，以峰面积和标准工作溶液的浓度绘制标准工作曲线，样品溶液中人参皂贰的响应值均在仪器的测定线性范围内.在上述色谱条件下，各种人参皂贰的保留时间见表2.各种人参皂贰的标准物质色谱图参见附录A中的图A.1.各种人参皂式的添加浓度及其平均回收率的结果参见附录B中的表B.1.
表2各种人参皂贰参考保留时间
人参皂式 保留时间/min 人参皂式 保留时间/minRe 4 632 Rb 10 310Rg 4 871 Rc 10 540Rf 10 014 Rb: 11 215
7.3平行试验
按照上述步骤，对同一试样进行平行试验测定.
7.4空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行.
8结果计算
人参中人参皂贰含量按式（1）计算：
（1)
式中：
X试样中被测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； （从标准曲线上得到被测组分溶液的浓度，单位为微克每毫升（gug/mL）；V样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；样品溶液所代表试样的质量，单位为克（g）.计算结果应扣除空白值.
9精密度
9.1一般规定
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算.
9.2重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r.人参中人参皂贰添加浓度范围及重复性方程见表3.
